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文檔簡(jiǎn)介
1、背景:鼻咽癌是一種與EB病毒感染有關(guān)、多基因參與、遺傳與環(huán)境因素協(xié)同作用的惡性腫瘤,在我國(guó)兩廣、福建發(fā)病率較高,其發(fā)病具有性別差異,男性發(fā)病是女性的兩倍以上。miRNA是一種廣泛存在于動(dòng)、植物以及病毒中的非編碼小分子RNA,它通過與靶mRNA結(jié)合抑制蛋白的翻譯或降解mRNA。MiRNA在染色體上的位置與腫瘤密切相關(guān),它通常位于與腫瘤發(fā)生有關(guān)的染色體區(qū)域。另外,miRNA還受表觀遺傳學(xué)調(diào)控,通過誘導(dǎo)沉默表達(dá)的腫瘤抑制基因(TSGs)再表達(dá)
2、,從而發(fā)揮抑制腫瘤的作用,因此miRNA的表達(dá)升高或降低可以起到致癌作用或抑癌作用,它的差異表達(dá)與腫瘤密切相關(guān)。近年來,人們?cè)谘?、血漿中發(fā)現(xiàn)存在大量miRNA,而且這些miRNA具有一定的特性:血清miRNA具有抗RNA酶、抗酸、抗堿、抗凍融處理的穩(wěn)定性;在正常人中血清miRNA的表達(dá)基本是一致的,但是腫瘤患者血清miRNA的表達(dá)卻有明顯差異,而且這些miRNA的差異表達(dá)程度與腫瘤的良惡性及預(yù)后呈一定的相關(guān)性,因此血清miRNA具有成
3、為腫瘤分子標(biāo)記物的條件。曾有學(xué)者對(duì)鼻咽癌患者的組織miRNA表達(dá)譜進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn),在鼻咽癌患者中有些miRNA表達(dá)明顯改變,例如,miR-29c的表達(dá)較正常人下調(diào)5倍,而本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),在潛伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)陽性表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞株中miR-19b表達(dá)升高10倍以上。目前,關(guān)于miRNA靶基因的預(yù)測(cè)有多種,但其具體的分子作用機(jī)制仍有待探討。
目的:(1)分別檢測(cè)血
4、清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人、鼻咽癌病人放化療后以及非癌人群中的表達(dá)差異,探討其作為鼻咽癌臨床診斷分子標(biāo)記物的意義,以及探討其作為鼻咽癌放化療后檢測(cè)復(fù)發(fā)標(biāo)記物的意義(2)分別檢測(cè)鼻咽癌病人和鼻咽粘膜慢性炎病人的組織蠟塊中miR-19b靶基因SOCS-1、miR-29c靶基因COL1A1的差異表達(dá),從而對(duì)miR-19b、miR-29c的分子通路作一個(gè)初步探討,為以后鼻咽癌的靶基因治療提供一項(xiàng)依據(jù)。
方法:(1)收
5、集鼻咽癌病人、鼻咽癌放化療后病人、非癌人群血清各30例,然后通過RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR技術(shù),分析血清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人放化療前后、鼻咽癌病人與非癌人群中的表達(dá)差異。(2)收集鼻咽癌病人及鼻咽部粘膜慢性炎病人的組織學(xué)蠟塊各30例,其中,收集蠟塊的鼻咽癌病人為曾經(jīng)采血的鼻咽癌病人,通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)其SOCS1及COL1A1的表達(dá)差異情況,并與其血清miR-19b、miR-29c的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析,從
6、而對(duì)miR-19b及miR-29c在鼻咽癌致癌作用中的分子通路做一個(gè)初步探討。
結(jié)果:(1)通過熒光定量PCR技術(shù)對(duì)血清miR-19b、miR-29c的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與非癌人群相比,血清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人與鼻咽癌放化療后的病人中有明顯增高的趨勢(shì),經(jīng)過SPSS17.0樣本均數(shù)的單因素方差分析發(fā)現(xiàn),miR-19b和miR-29c在鼻咽癌與非癌人群中存在顯著性差異(P<0.05),而鼻咽癌放化療前后無顯著
7、性差異。(2)經(jīng)過對(duì)鼻咽癌病人與鼻咽部粘膜慢性炎病人的組織切片免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SOCS-1在鼻咽癌中均呈陰性表達(dá),而在30例粘膜慢性炎的病人中有25例呈陽性或強(qiáng)陽性表達(dá),與miR-19b血清學(xué)檢測(cè)具有一致性,說明miR-19b的差異表達(dá)可能與SOCS-1相關(guān),經(jīng)過SPSS17.0相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),miR-19b與SOCS-1的表達(dá)存在負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)為-0.573。COL1A1在鼻咽癌病人與鼻咽部粘膜慢性炎病人中均為陰性表達(dá),經(jīng)過相關(guān)性
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