抗腫瘤中草藥貓人參的種質(zhì)鑒別及其與近緣種的活性比較研究.pdf

1、貓人參為華東地區(qū)治療各類消化道腫瘤的習(xí)用中草藥，是目前本地區(qū)抗腫瘤處方中最多用的品種之一。目前中藥學(xué)及植物學(xué)專著多記載其原植物為對萼獼猴桃(又稱鑷合獼猴桃)(Actinidia valvata Dunn)，但民間也有以大籽獼猴桃(A．macrosperma C.F.Liang)為貓人參的原植物，甚至認(rèn)為后者入藥療效更佳。而且因貓人參用量較大而野生資源有限，時常有同屬其它種類如黑蕊獼猴桃(A．melanandra Franch)、小葉獼猴

2、桃(A．lanceolata Dunn)、中華獼猴桃(A．chinensisPlanch.)等混用為貓人參，影響了本品的品質(zhì)和療效。因此，當(dāng)務(wù)之急首先要確定正品貓人參的原植物，并準(zhǔn)確鑒別其與混淆品：其次貓人參的近緣種能否代用，以擴(kuò)大目前嚴(yán)重緊缺的藥源?；诖四康?，本文考證了貓人參原植物，系統(tǒng)鑒別了貓人參及其混淆品，研究了貓人參有效部位HPLC圖譜與體外抗腫瘤活性，分析比較了貓人參及其混淆品的礦質(zhì)元素，確認(rèn)了貓人參貓草反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。

3、 1、原植物考證 通過民間與市場調(diào)查、藥材性狀與原植物形態(tài)鑒定、文獻(xiàn)查閱，根據(jù)原植物形態(tài)、藥用歷史和學(xué)名發(fā)表時間，明確了正品貓人參的主要來源應(yīng)為大籽獼猴桃，而對萼獼猴桃可能只是其次要來源。 2、種質(zhì)鑒別 從原植物形態(tài)、生藥性狀、熒光反應(yīng)、紫外光譜、熒光光譜、傅立葉變換紅外光譜(FT-IR)、PCR-RFLP等角度系統(tǒng)地鑒別了大籽獼猴桃及其近緣種，尤其是形態(tài)相似而一直被認(rèn)為是貓人參原植物的對萼獼猴桃。大籽獼猴桃

4、與對萼獼猴桃等近緣種的形態(tài)差異主要在繁殖器官花果上，因此營養(yǎng)生長期較難鑒別。以生藥性狀為基礎(chǔ)，結(jié)合9種獼猴桃生藥的蒸餾水、乙醇、氯仿、石油醚提取液在254 nm、365 nm紫外光激發(fā)下的熒光顏色，4種提取液的紫光光譜，水提液和醇提液的熒光光譜，完全、準(zhǔn)確鑒別了9種藥用獼猴桃，編制了鑒定檢索表。9種獼猴桃紅外譜圖總體較相似，但中華獼猴桃和毛花獼猴桃有強(qiáng)烈末端吸收，明顯區(qū)別于其它7種獼猴桃，進(jìn)一步比較大籽獼猴桃等7種獼猴桃與中華獼猴桃紅外

5、譜圖的相減譜圖，完全區(qū)分了9種獼猴桃，編制了鑒定檢索表。限制性內(nèi)切酶Ddel、DraI對大籽獼猴桃葉綠體trnK片段的酶切式樣具有特異性，建立了大籽獼猴桃的PCR-RFLP分子指紋圖譜，可有效鑒別貓人參混淆品的原植物。 3、體外抗腫瘤活性比較 體外抗腫瘤試驗結(jié)果表明，大籽獼猴桃對供試的3種腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的抑制作用，但敏感性存在差異，抑制效果為肝癌SMMC-7221(I<,50>=54.22μg/ml)>胃癌SGC-7

6、901(133.16μg/ml)>肺癌.A549(206.63μg/ml)。大籽獼猴桃和對萼獼猴桃對人肝癌細(xì)胞株SMMC-7221抑制活性差異顯著，后者(217.85μg/ml)僅為前者的1/4。異色獼猴桃、長葉獼猴桃、毛花獼猴、小葉獼猴桃桃對SMMC-7221的抑制效果均顯著優(yōu)于大籽獼猴桃，尤其是小葉獼猴桃的IC<,50>達(dá)到6.53μg/ml，活性相當(dāng)于大籽獼猴桃的8倍，是本研究的重大發(fā)現(xiàn)，值得進(jìn)一步研究。在人胃癌細(xì)胞株SGC-79

7、01、人肺癌細(xì)胞株A549試驗中，9種供試材料僅大籽獼猴桃和對萼獼猴桃有一定的抑制作用，而且二者活性相當(dāng)，差異不顯著。 基于活性分析結(jié)果，我們建議在治療胃癌和肺癌時，大籽獼猴桃和對萼獼猴桃活性接近，均可作貓人參入藥，其它種類不宜混用；而治療肝癌時，大籽獼猴桃的活性明顯高于對萼獼猴桃，對萼獼猴桃不宜作貓人參入藥，或者至少須用量加倍，驗證了富陽草藥醫(yī)認(rèn)為“白貨”對萼獼猴桃藥效不及“紅貨”大籽獼猴桃，需加倍使用的說法。 結(jié)合H

8、PLC圖譜和體外抗腫瘤活性結(jié)果，推測貓人參中起抗腫瘤作用的有效組分可能并不是其含量最高的幾個成分，而可能是本實驗條件下吸收強(qiáng)度較弱、分離度不佳的化合物。本試驗的HPLC圖譜仍需進(jìn)一步改進(jìn)洗脫條件，改善圖譜，以更加真實地反映乙酸乙酯部位的化學(xué)成分組成。 4、礦質(zhì)元素分析 礦質(zhì)元素(包括微量元素)與有效成分是中藥氣味的兩大物質(zhì)基礎(chǔ)，采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)測定、比較了貓人參及其混淆品和浙江地區(qū)常見

9、的其它藥用獼猴桃的礦質(zhì)元素含量。目前公認(rèn)的與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的微量元素有Cu、Zn、se、Fe。大籽獼猴桃Cu、Zn含量顯著高于其它8種獼猴桃，而Se含量較低，F(xiàn)e含量中等，說明貓人參的抗腫瘤作用還可能與高含量的Cu、zn有關(guān)?；诘V質(zhì)元素的聚類圖(加大了Cu、Fe、Se、Cu的權(quán)重)表明，大籽獼猴桃與其它8種獼猴桃均有較大差異，因此從抗腫瘤微量元素含量的角度，其它種類獼猴桃代用大籽獼猴桃作貓人參似乎并不適宜。 5、貓草反應(yīng)研