人參皂苷組合轉化組分抗腫瘤活性的研究.pdf

1、目的：
　　本課題探討了人參皂苷組合轉化組分（樣品A）對五種腫瘤細胞的體外抑制作用;在此研究的基礎上，探討樣品A對人肝癌HepG2細胞株的增殖抑制作用、促進凋亡作用以及其對HepG2細胞周期的影響，并初步探討了其作用機制，為研究樣品A的抗腫瘤作用靶點和臨床前研究提供理論依據。
　　方法：
　　按常規(guī)方法培養(yǎng)腫瘤細胞，選取生長狀態(tài)良好的對數期細胞，進行實驗研究。
　?、儆?0μg/ml、20μg/ml、40μg/m

2、l、80μg/ml和160μg/ml濃度梯度的樣品A，分別作用于人肝癌HepG2細胞株、人胃癌MGC-803細胞株、人胃癌SGC-7901細胞株、人宮頸癌Hela細胞株以及人宮頸癌Caski細胞株，分別培養(yǎng)作用24h、48h、72h后采用MTT法檢測5種腫瘤細胞的增殖情況，根據增殖抑制情況和IC50值，選擇抑制作用較好的細胞株，進行后期實驗;
　?、谠趯嶒灑俚幕A上選擇人肝癌HepG2細胞株作為后期研究對象。選取20μg/ml、4

3、0μg/ml、80μg/ml濃度梯度的樣品A，以48h為作用時間，進行細胞形態(tài)觀察（通過倒置顯微鏡和Hoechst33258熒光染色法）;采用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染技術，在流式細胞儀上檢測經3種不同濃度樣品A作用48h后，人肝癌HepG2細胞株的凋亡情況;采用PI單染技術，在流式細胞儀上檢測藥物處理后人肝癌HepG2細胞株周期變化情況;
　?、鄄捎肳estern blot免疫印跡技術，檢測經3種不同濃度樣品A作用48

4、h后，人肝癌HepG2細胞株中Bcl-2和Bax這兩種凋亡相關蛋白表達的變化。
　　結果：
　?、贅悠稟作用于人肝癌HepG2細胞株、人胃癌MGC-803細胞株、人胃癌SGC-7901細胞株、人宮頸癌Hela細胞株以及人宮頸癌Caski細胞株5種腫瘤細胞，均能產生一定程度的增殖抑制作用;其中，藥物對人肝癌HepG2細胞株的增殖抑制率可達到67.29％，作用最強。故而后期實驗選用人肝癌HepG2細胞作為實驗對象，20μg/ml

5、、40μg/ml、80μg/ml濃度梯度的樣品A作用48h進行實驗;
　?、?0μg/ml、40μg/ml、80μg/ml濃度梯度的樣品A作用人肝癌HepG2細胞48h后，細胞較正常形態(tài)相比發(fā)生了變化:細胞膜皺縮，細胞開始邊緣模糊、變圓發(fā)亮進而漂浮，染色質凝集、細胞核縮小斷裂顯點狀藍色熒光等凋亡特征，并呈一定的濃度依賴性;
　?、劢浟魇紸nnexinⅤ-FITC/PI雙染技術，結果顯示樣品A能夠誘導人肝癌HepG2細胞發(fā)生凋

6、亡，20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml組的抑制率分別由陰性對照組的3.62％上升至9.14％、20.79％和31.53％，并且這種促凋亡作用具有濃度依賴性;
　?、芙浟魇絇I單染技術，結果顯示樣品A能夠使處于G0/G1期的細胞增多，減少從G0/G1期進入S期的細胞數，促進細胞凋亡，這種促凋亡作用具有濃度依賴性;
　?、萁沇estern blot免疫印跡技術，結果顯示20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的