版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、稀有人參皂苷Compound K(C-K)在抗腫瘤等方面的獨特效果受到國內(nèi)外的關(guān)注。但是人參皂苷C-K在自然界含量極低,限制了人參皂苷C-K的應(yīng)用需要。為此,利用生物轉(zhuǎn)化法來制備稀有人參皂苷C-K已成為生物醫(yī)藥研究熱點之一。本實驗以來自Sulfolobus solfa taricus的β-糖苷酶(LacS)為基礎(chǔ),篩選高效催化主要人參皂苷Rb1為C-K的β-糖苷酶等的工業(yè)用酶。
首先通過易錯PCR建立突變文庫,然后給予選擇
2、壓力進行定向篩選,最后對改造后具有優(yōu)良特性的β-糖苷酶進行酶學(xué)性質(zhì)的表征。理論上LacS催化1分子Rb1生成C-K會產(chǎn)生3分子的還原糖。因此通過DNS法檢測還原糖的量來建立高通量的篩選方案,進而篩選出高活性人參皂苷催化酶。
實驗結(jié)果得到一株能夠高效催化Rb1變成C-K的優(yōu)良菌種。異源表達的LacS氨基酸的第218位由纈氨酸(Val)變成了甘氨酸(Gly)。由此將LacS催化Rb1的活性提高了2.5倍。突變后的LacS的最適
3、反應(yīng)溫度也由野生型(WT)的85℃下降到70℃。用0.04mg/ml的突變體LacS在McBuffer緩沖液(pH5.5)溶液中,70℃水浴條件下,可以在1h將3.2mg/mlRb1消耗完,97%轉(zhuǎn)化為C-K(mol/mol),為最終的工業(yè)化生產(chǎn)人參皂苷C-K提供了實驗基礎(chǔ)。
優(yōu)良的突變體相對于野生型只有一個氨基酸的變化,能充分證明LacS的218位點的氨基酸的變化導(dǎo)致了LacS的三維立體結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,這種改變使LacS
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人參皂苷糖苷酶Ⅳ型及其定向催化人參三醇皂苷的研究.pdf
- 人參皂苷及七葉皂苷抗肥胖活性研究.pdf
- 人參皂苷糖基水解酶的研究.pdf
- 人參根際土壤真菌與內(nèi)生真菌的多樣性及人參皂苷生物催化活性菌株的篩選.pdf
- 人參皂苷酶代謝產(chǎn)物化學(xué)修飾及其抗癌活性研究.pdf
- 人參果中非皂苷類活性物質(zhì)的研究.pdf
- 人參皂苷組合轉(zhuǎn)化組分抗腫瘤活性的研究.pdf
- 人參皂苷合成關(guān)鍵酶βAS基因轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf
- 人參皂苷的高效合成.pdf
- 稀有人參皂苷compound K的制備和活性研究.pdf
- 人參皂苷轉(zhuǎn)化菌株GsBt3的篩選及其轉(zhuǎn)化西洋參總皂苷的研究.pdf
- 人參皂苷溶血規(guī)律研究.pdf
- 人參皂苷Rd的生物合成制備及其生物活性研究.pdf
- 人參屬植物低極性皂苷的制備及抗菌活性研究.pdf
- 人參皂苷調(diào)控植物干細胞活性和端粒長度的研究.pdf
- 不同來源人參皂苷的比較及人參次苷H的研究.pdf
- β-葡萄糖苷酶的制備以及對人參皂苷的酶法轉(zhuǎn)化.pdf
- 人參次苷G中總皂苷的測定及人參皂苷C-K的藥代動力學(xué)研究.pdf
- 人參皂苷的分子光譜研究.pdf
- 人參皂苷微生物轉(zhuǎn)化及其抗腫瘤活性研究.pdf
評論
0/150
提交評論