油茶皂苷A抗腫瘤作用及其機制研究.pdf

1、目的：油茶皂苷A為（sasanquasaponin A）油茶（Camellia oleifera Abel）根提取分離的抗腫瘤有效成分，但其抗腫瘤作用及其機制還不明確。本課題采用體外和體內(nèi)多種實驗方法對油茶皂苷的抗肝癌、肺癌作用及機制進行初步研究。
　　方法：采用MTT細胞增殖實驗觀察油茶皂苷A對肝癌（BEL-7402）、肺癌（A549）細胞的增殖的影響；同時采用吉姆薩染色、觀察 BEL-7402、A549細胞形態(tài)變化；在小鼠體內(nèi)

2、，建立H22肝癌移植瘤模型，考察油茶皂苷A體內(nèi)抗腫瘤作用，HE染色觀察小鼠臟器組織及腫瘤組織形態(tài)變化，透射電鏡觀察腫瘤細胞結(jié)構(gòu)變化；Hoechest33342染色觀察細胞凋亡形態(tài)；流式細胞術檢測A549、BEL-7402細胞細胞周期和細胞凋亡變化；細胞透射電鏡觀察細胞自噬和凋亡。通過Western Blot法檢測BEL-7402和A549凋亡蛋白caspase-3、Bcl-2和自噬相關蛋白LC3等的表達變化。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果

3、顯示油茶皂苷A對肝癌BEL-7402和肺癌A549細胞增殖有抑制作用；油茶皂苷A作用A549、BEL-7402細胞24 h后，吉姆薩染色觀察發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞體積變小，細胞核濃縮，細胞碎裂；Hoechest33342染色發(fā)現(xiàn)隨著油茶皂苷A劑量的增加，發(fā)出強烈藍色熒光的細胞越來越多，凋亡細胞增多；細胞透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)細胞中出現(xiàn)自噬泡，細胞核膜破裂、染色質(zhì)聚集、出現(xiàn)凋亡小體，提示細胞自噬和凋亡；油茶皂苷A（1、2 mg/kg）能抑制H22荷瘤生長

4、（P<0.05，P<0.001），對小鼠胸腺表現(xiàn)出一定的毒性，并在2mg/kg時出現(xiàn)小鼠死亡；油茶皂苷 A（6.25，12.50，18.75μM）能顯著提高A549和BEL-7402細胞凋亡率（P<0.01，P<0.001）；油茶皂苷A能阻滯A549細胞于細胞周期G2期，阻滯BEL-7402細胞于S期；Western Blot法結(jié)果表明油茶皂苷A（18.75μM）可顯著上調(diào)BEL-7402，A549細胞中Caspase-3的表達（P<0