油茶皂苷B抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　油茶皂苷B是從油茶根中提取、分離的三萜皂苷單體，前期研究發(fā)現(xiàn)有抗腫瘤作用，但其抗腫瘤作用機(jī)制還不清楚。因此，本研究采用體內(nèi)外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)方法來探討油茶皂苷B的抗腫瘤作用和機(jī)制。
　　方法：
　　在體外，采用MTT法檢測油茶皂苷B對腫瘤細(xì)胞增殖的影響；采用吉姆薩染色法觀察細(xì)胞形態(tài)變化；Hoechst33342染色法觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)；Annexin V-FITC/PI雙染分析法檢測腫瘤細(xì)胞的凋亡率；采用細(xì)胞周期法

2、檢測油茶皂苷B對腫瘤細(xì)胞周期的影響；同時還采用了MDC染色、MDC熒光強(qiáng)度、透射電鏡以及ROS活性氧測試等實(shí)驗(yàn)方法來探討油茶皂苷B誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬；用Western blot方法分析油茶皂苷B對caspase3、Bcl-2、LC3、P53蛋白表達(dá)的影響；體內(nèi)，采用小鼠H22實(shí)體瘤模型探討油茶皂苷B在體內(nèi)的抗腫瘤作用。
　　結(jié)果：
　　MTT法結(jié)果顯示，油茶皂苷B可呈時間和劑量依賴關(guān)系抑制SMMC-7721人肝癌細(xì)胞和MCF-

3、7人乳腺癌細(xì)胞的增殖；吉姆薩染色結(jié)果提示油茶皂苷B給藥組細(xì)胞形態(tài)皺縮，變圓，染色加深，細(xì)胞核濃縮；Hoechst33342染色觀察到隨著油茶皂苷B劑量的升高，細(xì)胞凋亡的數(shù)目變多；同時，Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)果提示油茶皂苷B可誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721和人乳腺癌細(xì)胞MCF-7發(fā)生凋亡，油茶皂苷B給藥組誘導(dǎo)SMMC-7721和MCF-7細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率明顯增加；通過對細(xì)胞周期的分析，油茶皂苷B誘導(dǎo)SMMC-

4、7721細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，呈劑量依賴性增加。MDC熒光染色和透射電鏡結(jié)果分析可知，油茶皂苷B可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬，胞漿內(nèi)自噬泡明顯增加；ROS實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可知，油茶皂苷B可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS的釋放；為了驗(yàn)證油茶皂苷B誘導(dǎo)的自噬與誘導(dǎo)的凋亡之間的關(guān)系，通過Annexin V-FITC/PI分析結(jié)果可知，自噬抑制劑氯喹可抑制油茶皂苷B誘導(dǎo)的SMMC-7721和MCF-7腫瘤細(xì)胞凋亡，主要是影響早期凋亡的細(xì)胞數(shù)；Western blo

5、tting結(jié)果表明，油茶皂苷B下調(diào)Bcl-2和上調(diào)Caspase3、p53與LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值，均呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系；油茶皂苷B能抑制或顯著性抑制H22移植瘤生長(P<0.05)，且抑制率與劑量呈正相關(guān)，0.5mg/kg抑制率為37.255％；1.0mg/kg抑制率為46.249%，但高劑量表現(xiàn)出一定的毒性。
　　結(jié)論：
　　油茶皂苷B可誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞凋亡與自噬，其機(jī)制通過調(diào)節(jié)p53蛋白表