白首烏苷B抗腫瘤作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　?、購陌资诪蹩傑罩蟹蛛x白首烏苷 B(以下簡稱 CGB)。
　　②通過體內(nèi)、體外抗腫瘤試驗(yàn)考察CGB對(duì)多種瘤株的抑制作用。
　?、塾^察CGB對(duì)荷瘤小鼠免疫作用及體外誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡作用，探討其抗腫瘤作用的部分機(jī)制。
　　方法：
　　①采用柱層析分離制備CGB，并采用高效液相色譜分析CGB的化學(xué)組成。
　?、诓捎肕TT比色法、生長曲線法及細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察CGB對(duì)B-16、K-562、PC-3、H

2、ela、RM-1、SGC-7901、HepG2和A-549腫瘤細(xì)胞的增殖抑制能力。
　?、鄄捎肏-22、S-180、B-16和RM-1荷瘤小鼠模型，觀察CGB對(duì)各模型小鼠移植性腫瘤抑制作用。
　?、芡ㄟ^觀察荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞增殖能力及NK細(xì)胞活性，考察CGB對(duì)S-180荷瘤小鼠免疫增強(qiáng)作用。
　?、莶捎肈NA瓊脂糖凝膠電泳觀察特異性凋亡梯狀條帶；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化和凋亡率；RT-PCR檢測(cè)凋亡p53 mRNA的

3、表達(dá)，以觀察CGB誘導(dǎo)PC-3凋亡的作用。
　　結(jié)果：
　?、購陌资诪蹩傑罩蟹蛛x得到CGB6.9g(3.0％)。
　?、?CGB對(duì)B-16、K-562、PC-3、Hela、RM-1、SGC-7901、HepG2和A-549腫瘤細(xì)胞均有抑制作用，IC50分別為10.0±0.4、23.1±1.3、34.8±2.4、41.6±6.4、48.8±2.3、53.1±2.7、71.3±5.2、103.0±6.5μg/ml，且具有明

4、顯的劑量-效關(guān)系，生長曲線法表明CGB對(duì)PC-3和HepG2腫瘤細(xì)胞的作用隨著給藥濃度的增加而增強(qiáng)，且在一定的劑量范圍內(nèi)隨著時(shí)間的增加其對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的作用增強(qiáng)，具有明顯的量-效和時(shí)-效關(guān)系。細(xì)胞形態(tài)觀察到CGB能使細(xì)胞密度明顯降低，細(xì)胞皺縮，部分懸浮，細(xì)胞碎片增多。
　?、?CGB組對(duì)小鼠移植性S-180和H-22腫瘤的抑制率隨著濃度的升高而增加，有明顯的量-效關(guān)系。160mg/kg CGB劑量組對(duì)小鼠移植性S-180和H-22

5、腫瘤抑瘤率分別達(dá)到46.1±3.3％和37.0±1.4％，具有明顯的抗腫瘤作用(P<0.01)。在同等劑量下，CGB對(duì)小鼠移植性B-16和RM-1腫瘤抑瘤率分別為21.5％和0％，分別與模型組比較無明顯差異。
　?、蹸GB組與模型組比較，T淋巴細(xì)胞增殖率和NK細(xì)胞殺傷率明顯增大(P<0.05)，且T淋巴細(xì)胞增殖率和NK細(xì)胞殺傷率：CGB給藥組>模型組>CTX對(duì)照組。
　?、?PC-3細(xì)胞 DNA瓊脂糖凝膠電泳沒有明顯的凋亡梯

6、度。FCM結(jié)果顯示：較正常對(duì)照組，CGB組 PC-3細(xì)胞出現(xiàn)了明顯的亞二倍體峰，細(xì)胞凋亡百分率與正常對(duì)照組細(xì)胞相比均有極顯著差異(P<0.01)，在一定時(shí)間范圍內(nèi)，CGB對(duì)PC-3細(xì)胞的促凋亡作用具有時(shí)-效關(guān)系，細(xì)胞周期G0/G1期有所升高。RT-PCR結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組比較，CGB組PC-3細(xì)胞p53mRNA基因表達(dá)增加(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　① CGB對(duì)多種體外生長的腫瘤細(xì)胞及小鼠移植性腫瘤均有抑制作用，