抗腫瘤活性物質(zhì)的篩選及其抗腫瘤機(jī)制的研究.pdf

1、目的:建立一個(gè)抗腫瘤物質(zhì)篩選的方法，對來自于中藥的提取樣品進(jìn)行篩選，以期獲得具有抗腫瘤活性的化合物;并進(jìn)一步研究具有抗腫瘤活性的化合物的抑瘤作用機(jī)制，為開發(fā)新的抗腫瘤藥物奠定基礎(chǔ)。
　　方法:MTT比色法檢測不同濃度(100μg/mL、50μg/mL、10μg/mL、2μg/mL、0.4μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL)順鉑作用24h對人肝癌細(xì)胞SNU-387、人骨肉瘤細(xì)胞MG-63的影響，計(jì)算出不同濃度對應(yīng)的抑

2、制率，求出半數(shù)抑制濃度IC50;以順鉑為參照，選取高濃度50μg/mL作為篩選的初步濃度，分別對蒼術(shù)苷、白頭翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麥冬(MD)系列化合物和靈芝三萜(LZ)系列化合物2種細(xì)胞進(jìn)行篩選。通過順鉑進(jìn)行對比，選出抑制作用較為明顯的藥物進(jìn)行進(jìn)一步篩選，分別計(jì)算出半數(shù)抑制濃度IC50;最終選擇了4種藥物(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)采用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞儀進(jìn)

3、行細(xì)胞凋亡檢測，藥物分別濃度為50μg/mL、10μg/mL、2μg/mL，作用時(shí)間24h;通過Elisa法檢測4種藥物不同濃度（50μg/mL、10μg/mL、2μg/mL）對bax與bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:順鉑能有效抑制人肝癌細(xì)胞SNU-387、人骨肉瘤細(xì)胞MG-63的生長，24h半數(shù)抑制濃度IC50分別為6.391肛g/mL、16.592μg/mL，濃度達(dá)到50μg/mL抑制率均在90％附近;除靈芝三萜(LZ)

4、系列化合物、蒼術(shù)苷外，其他3類樣品(白頭翁皂苷(BTW)系列化合物、紫草(ZC)系列化合物、麥冬(MD)系列化合物）中均發(fā)現(xiàn)有高活性的物質(zhì)。其中ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11對于人肝癌細(xì)胞SNU-387半數(shù)抑制濃度IC50分別為10.86μg/mL、3.097μg/mL、1.633μg/mL、3.104μg/mL，ZC-17、MD-4對人骨肉瘤細(xì)胞MG-63半數(shù)抑制濃度IC50分別為5.465μg/mL、2.639μg/m

5、L;通過流式結(jié)果，對比陽性組（順鉑）和陰性組(DMSO)發(fā)現(xiàn)4種物質(zhì)(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均可以促進(jìn)人肝癌細(xì)胞SNU-387凋亡，凋亡率與藥物濃度相關(guān)，BTW11高濃度組誘導(dǎo)凋亡明顯。2種物質(zhì)(ZC-17、MD-4)均可促進(jìn)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡，MD-4在高劑量下壞死偏多;與對照組相比，發(fā)現(xiàn)陽性組和3種藥物(ZC-17、BTW10、BTW11)可上調(diào)人肝癌細(xì)胞SNU-387中bax的蛋白表達(dá)量，下調(diào)bcl

6、-2的蛋白表達(dá)量。同時(shí)ZC-17可上調(diào)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63中bax的蛋白表達(dá)量，下調(diào)bcl-2的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)論:4種物質(zhì)(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能明顯抑制腫瘤生長，且與濃度成一定關(guān)系;4種物質(zhì)(ZC-17、MD-4、BTW10、BTW11)均能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SNU-387凋亡，2種物質(zhì)(ZC-17、MD-4)均能誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63凋亡;通過對細(xì)胞凋亡蛋白bax與bcl-2的檢測，證明ZC