腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾ERCC1基因表達對卵巢癌細胞逆轉(zhuǎn)耐藥的體外實驗研究.pdf

1、目的: 研究在腺病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾ERCC1基因表達的基礎(chǔ)上，聯(lián)合順鉑作用于卵巢癌細胞敏感株SKOV3和順鉑耐藥株SKOV3/DDP，觀察此重組腺病毒(Ad-hTERT-ERCC1-siRNA)是否對卵巢癌細胞敏感株具有化療增敏作用及對耐藥株具有逆轉(zhuǎn)耐藥作用，以及其作用與藥物劑量的關(guān)系，為逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥提供實驗依據(jù)，為臨床改善卵巢癌患者的預(yù)后提供新方法。 方法: 第一部分：采用直接感染法、臺盼藍活細胞計

2、數(shù)、MTT、Hoechst染色法及流式細胞儀檢測等方法，研究腺病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾ERCC1基因表達對卵巢癌細胞敏感株SKOV3的生長抑制作用及其對卵巢癌順鉑化療的增敏作用。 第二部分：采用直接感染法，應(yīng)用臺盼藍活細胞計數(shù)法、MTT法、Hoechst染色法及流式細胞儀檢測等方法，研究腺病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾ERCC1基因表達對卵巢癌細胞順鉑耐藥亞株SKOV3/DDP的逆轉(zhuǎn)耐藥作用。 結(jié)果: 第一部分

3、 1.SKOV3細胞株順鉑IC50值為7.76μg/ml，腺病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾ERCC1基因表達對SKOV3細胞生長有一定的抑制作用； 2.Ad-hTERT-ERCC1-siRNA對SKOV3細胞順鉑敏感性的影響：與對照組相比，用1、10、50、80MOI的重組腺病毒感染后，對順鉑的敏感性分別增加了9.4％、16.4％、23.2％、33.5％,Ad-hTERT-ERCC1-siRNA能提高SKOV3細胞的順鉑敏感性，并呈劑

4、量依賴性： 3.Hoechst染色法觀察，梯度滴度Ad-hTERT-ERCC1-siRNA聯(lián)合順鉑作用于SKOV3細胞株，細胞凋亡顯著增加； 4.流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)，Ad-hTERT-ERCC1-siRNA感染并聯(lián)合順鉑用藥，G1期細胞比例減少，S期細胞比例增加；細胞凋亡率進一步增加。 第二部分 1.SKOV3/DDP細胞株順鉑IC50值為13.93μg/ml，耐藥指數(shù)為1.79，Ad-hTERT-ERC

5、C1-siRNA對SKOV3/DDP細胞生長有一定程度抑制作用； 2.Ad-hTERT-ERCC1-siRNA對SKOV3/DDP細胞順鉑耐藥的影響：與對照組細胞相比，用1、10、50、80MOI的腺病毒感染后，對順鉑的敏感性分別增加了11.1％、16.7％、26.4％、33.5％。可見Ad-HTERT-ERCC1-siRNA能部分逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細胞的順鉑耐藥性，并呈劑量依賴性： 3.Hoechst染色法觀察，梯

6、度滴度Ad-hTERT-ERCC1-siRNA聯(lián)合順鉑作用于SKOV3/DDP細胞株，細胞凋亡顯著增加； 4.流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)，Ad-hTERT-ERCC1-siRNA感染并聯(lián)合順鉑用藥G1期細胞比例增加，S期細胞比例增加；細胞凋亡率進一步增加。 結(jié)論: 1.重組腺病毒Ad-hTERT-ERCC1-siRNA對卵巢癌細胞SKOV3及其順鉑耐藥亞株SKOV3/DDP有一定程度生長抑制作用； 2.重組腺病毒