RNA干擾EGFR基因?qū)β殉舶╉樸K耐藥細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、RNA干擾EGFR基因?qū)β殉舶╉樸K耐藥細(xì)胞凋亡的影響摘要目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)研究重組質(zhì)粒pEGFR—shRNA對(duì)卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3／DDP中EGFR基因表達(dá)水平的抑制情況，探討重組質(zhì)粒作用于卵巢癌耐藥細(xì)胞SKOV3／DDP后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。方法構(gòu)建攜帶EGFR小發(fā)夾干擾RNA(pEGFR—shRNA)的重組質(zhì)粒表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)染SKOV3／DDP細(xì)胞。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)和免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞

2、內(nèi)EGFRmRNA和蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞周期和凋亡率。結(jié)果DNA測(cè)序證實(shí)EGFR質(zhì)粒農(nóng)達(dá)載體中shRNA插入序列完全正確。特異性轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞EGFRmRNA的表達(dá)明顯受抑制。蛋白質(zhì)的表達(dá)水平顯著降低。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果濕示：順鉑作用后，特異性轉(zhuǎn)染組細(xì)胞周期分布發(fā)生明顯改變，G。／G，期細(xì)胞比例增多，S期細(xì)胞比例減少。凋亡率顯著升高。結(jié)論利用RNA十?dāng)_技術(shù)設(shè)計(jì)并體外合成靶向EGFR的序列特異性shRNA轉(zhuǎn)染人卵巢癰細(xì)胞