HBsAg沖擊對慢性肝炎患者外周血來源DC的作用及激發(fā)CTL的效應(yīng).pdf

1、目的:研究HBsAg抗原沖擊對慢性乙型肝炎病人外周血單核細(xì)胞來源的、體外培養(yǎng)誘導(dǎo)的樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell,DC)的免疫分子表達(dá)、免疫功能以及激發(fā)抗HBsAg特異性細(xì)胞免疫的影響,初步探討以DC為免疫佐劑,體外激發(fā)高特異性抗HBV細(xì)胞免疫的途徑,從而為慢性乙型肝炎免疫治療提供新依據(jù).方法:分離慢性乙型肝炎患者外周血單核細(xì)胞,以GM-CSF(800u/ml)+IL-4(500u/ml)+TNF-α(250u/ml)細(xì)胞因子

2、組合誘導(dǎo)的DC,于培養(yǎng)第4天將培養(yǎng)的DC分成兩組,一組加入純化的HBsAg(10ng/ml)抗原進(jìn)行沖擊,稱為實(shí)驗(yàn)組,另外一組的DC按常規(guī)方法繼續(xù)培養(yǎng)稱之為對照組.兩組均于第7天,以FACS測定細(xì)胞表面免疫分子CD1a、CD83、CD86、CD80、CD40、HLA—DR的表達(dá)水平,ELISA法檢測培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-6、IL-12的分泌含量及DC刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力.該實(shí)驗(yàn)還將誘導(dǎo)的DC于培養(yǎng)的第4天以純化的HBsAg進(jìn)行

3、沖擊,第5天與自體T細(xì)胞共培養(yǎng),第7天再次用抗原沖擊,在第10天采用LDH法分別檢測T細(xì)胞對HepG2 2.2.15、HepG2肝癌細(xì)胞株及K562白血病細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用.結(jié)論:慢性乙型肝炎患者外周血單核細(xì)胞經(jīng)GM—CSF+IL-4+TNF-α誘導(dǎo)的DC經(jīng)HBsAg抗原沖擊后,CD1a、CD83、CD86、CD80、CD40、HLA—DR等分子呈上調(diào)性表達(dá),刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖的能力增強(qiáng),分泌的IL-12明顯增高,分泌IL-6明顯