抗Ⅳ型膠原酶單域抗體與力達(dá)霉素構(gòu)建的基因工程強(qiáng)化融合蛋白及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、腫瘤靶向性治療藥物的成功發(fā)展在某種程度上依賴于治療藥物的位點(diǎn)特異性輸送和被輸送藥物的生物活性.單抗一直被用來給予其他無選擇性的細(xì)胞毒藥物諸如毒素、放射性核素的選擇能力.但是單抗的大分子使其在實(shí)際應(yīng)用中受到諸多限制.來源于小鼠的單克隆抗體3G11具有特異性結(jié)合Ⅳ型膠原酶的特性,以其為基礎(chǔ)構(gòu)建導(dǎo)向藥物取得了較好的療效.為了獲得更加小型化的抗體片段和腫瘤靶向性免疫治療藥物,本研究分別構(gòu)建了抗Ⅳ型膠原酶單抗3G11的單鏈抗體及單域抗體與力達(dá)霉素

2、的基因工程融合蛋白,并分別對它們的活性進(jìn)行了系列研究.一、抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體3G11-scFv在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及活性研究Ⅳ型膠原酶是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲與轉(zhuǎn)移的重要分子基礎(chǔ),也是抗癌藥物的新靶點(diǎn).本研究首先通過PCR擴(kuò)增得到單鏈抗體基因,將其克隆入質(zhì)粒pET-30(+)中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-scFv.經(jīng)酶切鑒定和序列測定后,將pET-scFv轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21star(DE3)中,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá).本實(shí)驗(yàn)提供了一種在大腸桿菌

3、中高效表達(dá)活性單鏈抗體的方法,同時(shí)為抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體3G11-scFv作為小型化的單抗導(dǎo)向藥物的載體提供了依據(jù)和可行性.二、單抗3G11的重鏈可變區(qū)單域抗體與力達(dá)霉素構(gòu)建的基因工程強(qiáng)化融合蛋白及其抗腫瘤活性研究單域抗體(single domain antibody)是抗體的最小功能結(jié)合單位,相當(dāng)于人抗體的重鏈或輕鏈可變區(qū)(VH/VL),是繼全抗、Fab、scFv之后的新一代的治療抗體.單域抗體具有傳統(tǒng)抗體和小分子藥物的雙重優(yōu)勢,作為

4、腫瘤靶向藥物的載體有著誘人的前景.大分子肽類抗腫瘤抗生素力達(dá)霉素(1idamycin,LDM,又稱C1027)具有細(xì)胞毒作用強(qiáng)、體內(nèi)抗腫瘤活性高的特點(diǎn),是單抗導(dǎo)向藥物的理想"彈頭".力達(dá)霉素由輔基蛋白(LDP)和活性烯二炔發(fā)色團(tuán)(active enediyne,AE)組成.LDP和AE可拆分和重建,因此可基因重組單域抗體片段和輔基蛋白,然后加入發(fā)色團(tuán)進(jìn)行分子重建產(chǎn)生更加小型的單抗導(dǎo)向藥物.三、單抗3G11的輕鏈可變區(qū)單域抗體與力達(dá)霉素構(gòu)