抗痘苗病毒基因工程抗體的研究.pdf

1、　　首先，我們進(jìn)行了抗VACVFab噬菌體抗體庫(kù)的構(gòu)建。我們先采集具有高滴度VACV抗體的免疫鼠脾，分離淋巴細(xì)胞，然后進(jìn)行總RNA的提取以及cDNA的合成，接著用一系列特異性的PCR引物通過(guò)PCR擴(kuò)增特異性輕鏈基因和重鏈Fd段基因，在對(duì)PCR產(chǎn)物鑒定和純化后，用輕鏈混合物與噬菌粒pComb3構(gòu)建輕鏈庫(kù)，隨后隨機(jī)挑選克隆進(jìn)行輕鏈插入率鑒定，在確保輕鏈庫(kù)的質(zhì)量后，將重鏈混合物克隆入輕鏈庫(kù)中構(gòu)建Fab噬菌體抗體庫(kù)，同樣隨機(jī)挑選克隆進(jìn)行重鏈插入

2、率鑒定。最后使用輔助噬菌體對(duì)Fab噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行包裝，檢測(cè)庫(kù)容量，結(jié)果表明我們所構(gòu)建的Fab噬菌體抗體庫(kù)的容量為2×107，輕鏈插入率和重鏈插入率分別為100％和90％，足以滿足我們篩庫(kù)的需要?！　≡诔晒?gòu)建Fab噬菌體抗體庫(kù)的基礎(chǔ)上，我們用純化的VACV病毒對(duì)Fab噬菌體抗體庫(kù)進(jìn)行富集，目的是擴(kuò)大篩選范圍，有效地篩選出特異性抗VACVFab抗體。隨機(jī)挑選50個(gè)3次富集篩選后的單菌落對(duì)其進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá)，并通過(guò)ELISA進(jìn)行篩選，共獲