E-cadherin啟動子甲基化在低氧誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用研究.pdf

1、目的:
　　 觀察低氧誘導(dǎo)的人近端腎小管上皮細(xì)胞株(HKC)轉(zhuǎn)分化(EMT)過程中甲基化轉(zhuǎn)移酶1(Dnmt1)水平的變化，及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)啟動子區(qū)DNA甲基化狀態(tài)，同時觀察甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC)和去乙?；敢种苿㏕richostatin A(TSA)對低氧誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞EMT進(jìn)程的影響并探討其可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 低氧培

2、養(yǎng)HKC細(xì)胞，采用RT-PCR和Western blot分別檢測Dnmt1 mRNA和蛋白表達(dá)，甲基化特異性PCR(MSP)檢測E-cadhein啟動子區(qū)基因甲基化狀態(tài)，Western blot檢測e-cadherin,vimentin蛋白表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光檢測e-cadherin,vimentin蛋白分布。HKC加入5-aza-dC或TSA預(yù)處理后于低氧培養(yǎng)，檢測上述各指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 低氧誘導(dǎo)HKC轉(zhuǎn)分化的

3、模型中，HKC細(xì)胞Dnmt1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著增加,E-cadherin啟動子區(qū)甲基化呈超甲基化狀態(tài)。用甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC預(yù)處理后則可以部分抑制低氧刺激引起的EMT及Dnmt1表達(dá)上調(diào)，而用去乙?；敢种苿㏕SA預(yù)處理也可部分抑制低氧刺激引起的EMT，但對Dnmt1的表達(dá)沒有顯著影響。
　　 結(jié)論：
　　 E-cadherin啟動子超甲基化有可能在低氧刺激誘導(dǎo)的HKC細(xì)胞EMT中起關(guān)鍵作用，而甲基化