牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs凋亡信號(hào)通路的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:牙齒受力時(shí),外力通過(guò)牙周膜傳遞并分散至頜骨,從而引發(fā)牙周組織對(duì)外力作用的生理應(yīng)答。牙周膜細(xì)胞對(duì)機(jī)械刺激的反應(yīng)在牙周改建中具有非常重要的作用。前期研究表明,牽張力可以引起牙周膜細(xì)胞早期凋亡,但是具體機(jī)制尚不清楚,因此本研究力圖探討牽張力引起牙周膜細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路,以期能夠?yàn)榭谇恍迯?fù)和正畸合理選擇基牙,牙齒合理施力以及牙周病防治等方面提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：通過(guò)原代和傳代培養(yǎng)獲得生長(zhǎng)穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)用人牙周膜細(xì)胞,然后利

2、用動(dòng)態(tài)機(jī)械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置對(duì)人牙周膜細(xì)胞加載1％、10％和20％的動(dòng)態(tài)牽張應(yīng)變6h、12h、24h和48h,通過(guò)流式細(xì)胞儀和激光掃描共聚焦顯微鏡對(duì)經(jīng)過(guò)TUNEL染色的細(xì)胞進(jìn)行晚期凋亡檢測(cè),同時(shí)利用酶標(biāo)儀檢測(cè)Caspase-3活性以及添加Caspase-8和Caspase-9阻斷劑后Caspase-3活性,并采用基因芯片檢測(cè)細(xì)胞在不同機(jī)械應(yīng)變下凋亡相關(guān)基因的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、人牙周膜細(xì)胞在體外培養(yǎng)4～8代

3、的性狀穩(wěn)定,適宜于進(jìn)行力學(xué)加載實(shí)驗(yàn)；
　　 2、細(xì)胞加載后,呈現(xiàn)柵欄狀相互平行排列的趨勢(shì),細(xì)胞排列方向垂直于牽張力方向,且隨著加載應(yīng)變和加載時(shí)間的增加,細(xì)胞相互平行的趨勢(shì)愈明顯；
　　 3、通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)TUNEL染色的細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn),各應(yīng)變組細(xì)胞的晚期調(diào)亡率在加載24h時(shí)達(dá)到該應(yīng)變組的峰值,且具有一定的時(shí)間和應(yīng)變值依賴性,但隨著加載時(shí)間的延長(zhǎng),48h時(shí)各應(yīng)變組細(xì)胞的晚期調(diào)亡率均下降；
　　 4、通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)C

4、aspase-3蛋白酶活性發(fā)現(xiàn),Caspase-3活性具有一定的時(shí)間和應(yīng)變值依賴性,各應(yīng)變組細(xì)胞的Caspase-3活性在加載24h時(shí)達(dá)到該應(yīng)變組的峰值,和晚期凋亡率變化趨勢(shì)一致；
　　 5、通過(guò)阻斷實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),Caspase-9激活Caspase-3介導(dǎo)的凋亡通路參與了牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs的凋亡；
　　 6、通過(guò)基因芯片檢測(cè)牽張應(yīng)變前后凋亡相關(guān)基因變化的研究發(fā)現(xiàn),20％-6h組和20％-24h組分別與對(duì)照組比較均有9

5、個(gè)表達(dá)上調(diào)基因和2個(gè)表達(dá)下調(diào)基因,20％-6h組和20％-24h組比較有2個(gè)表達(dá)上調(diào)基因和1個(gè)表達(dá)下調(diào)基因。
　　 結(jié)論：通過(guò)動(dòng)態(tài)機(jī)械應(yīng)變細(xì)胞加載裝置對(duì)人牙周膜細(xì)胞的牽張加載,發(fā)現(xiàn)牽張應(yīng)變可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期凋亡,且具有時(shí)間和應(yīng)變值依賴性,24h時(shí)晚期調(diào)亡率達(dá)到峰值,Caspase-3活性與凋亡率變化趨勢(shì)一致,且Caspase-9激活Caspase-3介導(dǎo)的凋亡通路參與了牽張應(yīng)變誘導(dǎo)HPDLCs的凋亡。此外,通過(guò)基因芯片檢測(cè),初