腸道病毒71型拮抗TLR3信號(hào)通路及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、腸道病毒71型(EV71)是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體之一,其感染可導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,約90％的手足口重癥病例均由EV71引起。目前EV71的致病機(jī)制尚不完全清楚,研究表明其感染后引起免疫系統(tǒng)的功能障礙與其致病機(jī)制相關(guān)。前期研究發(fā)現(xiàn),干擾素可以抑制EV71在小鼠中的復(fù)制,EV71編碼3C蛋白可以抑制干擾素的產(chǎn)生,但其具體機(jī)制尚不完全清楚。本文對(duì)EV713C蛋白對(duì)天然免疫的TLR3(Toll-like receptor3)信號(hào)通路

2、的抑制作用和病毒對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用進(jìn)行了研究,并進(jìn)一步闡明了其作用的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果顯示,3C蛋白可以切割TLR3信號(hào)通路的效應(yīng)分子β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β,TRIF)并抑制其誘導(dǎo)的IFNβ和NF—κB啟動(dòng)子的激活。鑒于病毒感染后引起TRIF切割的機(jī)制一方面由病毒蛋白酶活性引起,另一重要原因是病毒感染引起半胱氨酸天

3、冬氨酸蛋白酶(Caspase)的激活,激活的Caspase引起TRIF切割。進(jìn)而通過Caspase抑制劑Z-VAD抑制實(shí)驗(yàn)及TRIF中Caspase切割位點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)3C蛋白誘導(dǎo)的TRIF切割并不依賴于Caspase。3C蛋白酶活性位點(diǎn)的突變實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)3C蛋白酶活性是TRIF切割所必需的。最后通過缺失突變和點(diǎn)突變的方法精確定位了3C蛋白在TRIF上的切割位點(diǎn)為Q312S313。所以EV71感染下調(diào)TLR3信號(hào)通路中的TRIF表達(dá)可能

4、是其抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的原因之一。
　　 病毒感染后,機(jī)體除了通過產(chǎn)生干擾素來抑制病毒繁殖復(fù)制,還可以通過凋亡的方式來抑制病毒入侵,但是同時(shí)細(xì)胞凋亡也是病毒致病的主要機(jī)制之一。結(jié)果顯示,EV71感染RD細(xì)胞可以明顯的抑制細(xì)胞增殖,而這種抑制作用是由細(xì)胞凋亡引起的,因?yàn)橥ㄟ^檢測凋亡相關(guān)的重要蛋白,發(fā)現(xiàn)EV71感染可以引起Caspase3、8的激活,并且Caspase3底物PARP也可以被切割,說明EV71感染RD細(xì)胞引起caspa

5、se依賴的細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡過程中凋亡蛋白Bax起著重要的作用,EV71感染RD細(xì)胞后不僅可以檢測到Bax蛋白表達(dá)的上調(diào),還可以檢測到Bax構(gòu)象變化,進(jìn)一步引起凋亡,說明Bax在EV71誘導(dǎo)的凋亡中起著重要作用。
　　 綜上所述,EV713C蛋白可通過切割TRIF來拮抗TLR3信號(hào)通路中干擾素的產(chǎn)生,有關(guān)結(jié)果揭示了EV71抑制宿主天然免疫的另一機(jī)制。EV71感染RD細(xì)胞可以誘導(dǎo)Caspase和Bax依賴的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果為闡