細(xì)菌脂蛋白耐受對炎癥反應(yīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響以及對膿毒癥小鼠心功能的保護(hù)作用.pdf

1、全文分為二部分： 第一部分 BLP耐受對人THP-1細(xì)胞TLR<,2>及其下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和 TNF-α表達(dá)的影響 目的：觀察不同劑量細(xì)菌脂蛋白(BLP)刺激后，人單核細(xì)胞(THP-1)Toll樣受體2(TLR<,2>)、髓系分化因子88蛋白(MyD88)表達(dá)及腫瘤壞死因子(TNF-α)含量的變化。 方法：用小劑量BLP誘導(dǎo)THP-1產(chǎn)生耐受，再以大劑量BLP攻擊，分別比較對照組、BLP耐受組、耐受后攻擊組和直接攻擊

2、組TLR<,2>、MyD88和TNF-α的表達(dá)。以Westem Blot測定TLR2和MyD88蛋白含量。ELISA法測定TNF-α含量。 結(jié)果：BLP耐受組、耐受后攻擊組和直接攻擊組的TNF-α水平均高于對照組，而耐受后攻擊組的TNF-α表達(dá)明顯低于直接攻擊組，各組間TLR<,2>和MyD88蛋白含量無明顯改變。 結(jié)論：BLP可刺激機(jī)體產(chǎn)生炎癥因子，小劑量BLP誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生BLP耐受，抑制細(xì)胞表達(dá)TNF-α，

3、但不同劑量BLP對TLR<,2>和MyD88的蛋白表達(dá)無影響。 第二部分 膿毒癥對心臟功能的影響及BLP耐受的保護(hù)作用 目的：了解膿毒癥對小鼠心臟功能的影響，觀察細(xì)菌脂蛋白耐受對心功能的保護(hù)作用并研究其作用機(jī)制。 方法：成年雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組、膿毒癥組(剖腹手術(shù)行盲腸結(jié)扎穿孔致膿毒癥)、BLP耐受+膿毒癥組，以假手術(shù)組術(shù)前(0h)作為正常對照。分別在0h、2h、6h、12h四個時間點做小

4、鼠二維超聲心動圖選擇心率(HR)、左心室短軸縮短率(％FS)、射血分?jǐn)?shù)(EF％)、心輸出量(CO)等做為觀測指標(biāo)。Western blot測定心肌細(xì)胞TLR2蛋白表達(dá)，心肌勻漿測定細(xì)胞因子TNF-α濃度。心肌免疫組化觀察心肌組織內(nèi)巨噬細(xì)胞浸潤情況。 結(jié)果：假手術(shù)組的HR、FS和EF自0h至6h呈持續(xù)上升趨勢，術(shù)后6h達(dá)頂點(與0h相比p<0.05)，此后下降，術(shù)后12h接近0h水平；CO自0h下降，2h時達(dá)最低(與0h相比p<0

5、.05)，此后回升，12h時接近0h水平。膿毒癥組的HR、FS和EF術(shù)后短暫上升，2h后HR和FS有所下降，EF上升趨緩，6h時HR、FS和EF仍高于0h水平，但此后明顯下降，至12h時降至低于0h水平；而CO自0h呈持續(xù)下降，至12h明顯低于0h水平(p<0.05)。BLP耐受+膿毒癥組0h至6h時段HR、FS、EF和CO的變化趨勢與膿毒癥組相同，但前者FS、EF和CO的值均低于膿毒癥組(P<0.05)；而6h后膿毒癥組的4項指標(biāo)繼續(xù)

6、下降，BLP耐受+膿毒癥組轉(zhuǎn)而上升，至12h時顯著高于膿毒癥組(P<0.05)。心肌細(xì)胞TLR2蛋白表達(dá)及心肌勻漿中TNF-α含量各組間無差異。心肌免疫組化顯示，對照組及假手術(shù)組各時相均未見巨噬細(xì)胞浸潤，膿毒癥組12h時出現(xiàn)巨噬細(xì)胞浸潤，BLP耐受+膿毒癥組2h時見巨噬細(xì)胞浸潤，6h及12h均未見巨噬細(xì)胞浸潤。 結(jié)論：手術(shù)對心臟功能有抑制作用；膿毒癥對心臟功能有明顯抑制：BLP耐受具有心功能保護(hù)作用：膿毒癥早期心功能的變化可能與