辛伐他汀預(yù)處理對(duì)膿毒癥大鼠凝血功能及肝臟C反應(yīng)蛋白的影響.pdf

1、目的:膿毒癥(sepsis)是感染病原體與宿主免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)、凝血反應(yīng)之間相互作用,造成機(jī)體器官功能損害的復(fù)雜臨床綜合征,是危重患者的最主要死亡原因之一。在膿毒癥時(shí),同時(shí)啟動(dòng)的炎癥反應(yīng)與凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)構(gòu)成其主要病理生理機(jī)制,過度的炎癥反應(yīng)和失控的凝血瀑布效應(yīng)最終可導(dǎo)致器官功能障礙甚至死亡。膿毒癥患者中凝血系統(tǒng)功能紊亂非常普遍,包括促凝活性增強(qiáng)、抗凝活性減弱、纖溶系統(tǒng)受抑制等,凝血系統(tǒng)過度激活最終引起凝血因子消耗和出血傾向,而發(fā)生彌散性

2、血管內(nèi)凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)。毛細(xì)血管內(nèi)微血栓的形成是膿毒癥的重要特征之一。近年來國外研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物作為膿毒癥治療藥物能夠有效保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,具有抗炎、抗凝、減輕重要臟器損傷等作用,并降低死亡率,為膿毒癥的治療提供了新的手段。本研究應(yīng)用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture,CLP)建立膿毒癥大鼠模型,觀察辛伐他汀預(yù)處理對(duì)膿毒

3、癥大鼠凝血功能及肝臟C反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein,CRP)的影響,通過多個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)認(rèn)識(shí)膿毒癥病生理的發(fā)生與發(fā)展及他汀類藥物的保護(hù)作用機(jī)制,以期用新的干預(yù)方式治療膿毒癥,減少并發(fā)癥,降低病死率。
　　 方法:清潔級(jí)健康雌性wistar大鼠80只,體重200-250g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(Ⅰ組,n=8):麻醉后活殺動(dòng)物;假手術(shù)組(Ⅱ組,n=24):麻醉后開腹翻動(dòng)盲腸后關(guān)腹;膿

4、毒癥模型組(Ⅲ組,n=24):麻醉后開腹行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù);辛伐他汀預(yù)處理組(Ⅳ組,n=24):盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)前給予辛伐他汀20mg.kg-1.day-1,溶于1ml滅菌注射用水,灌胃連續(xù)兩周,其余各組給予等量的生理鹽水灌胃。各實(shí)驗(yàn)組按時(shí)間點(diǎn)(6h、24h、48h)處死大鼠留取標(biāo)本,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)活殺8只大鼠,留取血液及肝組織標(biāo)本。
　　 監(jiān)測并記錄各組大鼠一般表現(xiàn)如:被毛、精神狀態(tài)、肛溫及存活率;應(yīng)用全自動(dòng)血液分析儀對(duì)各組大鼠全血白

5、細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)進(jìn)行測定;留取的血清標(biāo)本進(jìn)行組織因子(tissue factor,TF)、纖溶酶原激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)檢測;留取肝組織標(biāo)本應(yīng)用免疫組化法檢測CRP水平。
　　 全部數(shù)據(jù)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,組間比較采用單因素方差分析(One wayANOVA),計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)(確切概

6、率法),P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠一般表現(xiàn)
　　 正常對(duì)照組大鼠活動(dòng)正常,反應(yīng)靈敏,被毛順滑有光澤,呼吸均勻平穩(wěn),排便正常,剖腹未見惡臭、血性滲出液及腸管脹氣,無死亡;假手術(shù)組大鼠術(shù)后1h完全醒轉(zhuǎn),體溫逐漸恢復(fù)正常,自由飲水,一般狀況同正常對(duì)照組,無死亡。膿毒癥模型組大鼠于術(shù)后1.5h完全醒轉(zhuǎn),精神萎靡,身體蜷縮,豎毛,呼吸頻率加快,直腸溫度降低,少量活動(dòng)、飲水,對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍,腹

7、脹明顯,排稀水樣便。剖腹后可聞及惡臭,結(jié)扎端盲腸發(fā)黑,表面有黃色膿液,小腸脹氣,腹腔內(nèi)大量血性滲出液,肝臟表面出現(xiàn)大量瘀點(diǎn)。辛伐他汀預(yù)處理組大鼠在各觀察時(shí)間點(diǎn)存活數(shù)量均較未治療組多,存活大鼠的活動(dòng)性、反應(yīng)狀況明顯優(yōu)于未治療組。
　　 2存活率
　　 正常對(duì)照組、假手術(shù)組48h內(nèi)大鼠存活率為100％,膿毒癥模型組及辛伐他汀預(yù)處理組大鼠6h內(nèi)存活率為100％,隨時(shí)間的延長,存活率逐漸下降,辛伐他汀預(yù)處理組大鼠在24h、48h

8、內(nèi)的存活率較膿毒癥模型組升高,但統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示辛伐他汀預(yù)處理組大鼠存活率與膿毒癥模型組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　 3白細(xì)胞計(jì)數(shù)
　　 膿毒癥模型組大鼠6h、24h、48h白細(xì)胞計(jì)數(shù)較假手術(shù)組比較均值下降50％,膿毒癥模型符合動(dòng)物SIRS診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 4肛溫比較
　　 電子體溫計(jì)監(jiān)測各組大鼠直腸溫度。膿毒癥模型組大鼠6h、24h、48h肛溫較假手術(shù)組比較下降超過1℃,膿毒癥模型符合動(dòng)物SIRS

9、診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 5組織因子(TF)
　　 假手術(shù)各時(shí)間點(diǎn)TF含量與正常對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.5);CLP后6h、24h、48h血清TF含量均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01),6h血清TF含量明顯升高,24h達(dá)到高峰,48h有所下降;辛伐他汀預(yù)處理組6h、24h、48h血清TF含量與膿毒癥模型組比較均明顯下降(180.45±61.20 vs312.15±83.54;341.63±53.52 vs448.1

10、8±54.19;203.13±52.64vs310.37±39.75,P＜0.01)。
　　 6纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)
　　 假手術(shù)各時(shí)間點(diǎn)PAI-1含量與正常對(duì)照組比較無差異(P均＞0.5);CLP后6h、24h、48h血清PAI-1含量均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.01),6h血清PAI-1含量明顯升高,24h達(dá)到高峰,48h有所下降;辛伐他汀預(yù)處理組6h、24h、48h血清PAI-1含量與膿毒癥模型組比較

11、均明顯下降(2.08±0.31 vs2.71±0.39;2.06±0.37 vs3.42±0.58;1.75±0.24 vs2.32±0.25,P＜0.01)。
　　 7血小板計(jì)數(shù)(PLT)
　　 假手術(shù)各時(shí)間點(diǎn)血小板計(jì)數(shù)與正常對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.5);CLP后6h、24h、48h PLT均低于假手術(shù)組(P＜0.01),6h PLT與假手術(shù)組比較明顯下降,隨著時(shí)間的延長,PLT呈逐漸降低趨勢(shì);辛伐他汀預(yù)

12、處理組6h、24h、48h PLT與膿毒癥模型組比較均明顯上升(629.33±31.94 vs524.00±65.74;571.67±22.01 vs514.33±32.32;546.00±34.04vs452.00±32.00,P＜0.01)。
　　 8肝組織C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的表達(dá)
　　 肝臟CRP表達(dá)主要在細(xì)胞漿中,以棕黃色著色為陽性細(xì)胞,假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)與正常組CRP表達(dá)無差異(P均＞0.5),肝小葉中肝細(xì)

13、胞排列整齊,假手術(shù)組有少量陽性細(xì)胞表達(dá);膿毒癥模型組大鼠肝臟CRP陽性細(xì)胞表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)較假手術(shù)組比較明顯增多(P＜0.01),造模組24h陽性細(xì)胞比例數(shù)較6h、48h增高,肝小葉中肝細(xì)胞排列紊亂;辛伐他汀預(yù)處理組大鼠肝臟CRP陽性細(xì)胞表達(dá)較膿毒癥組各時(shí)間點(diǎn)減輕(15.00±3.00 vs27.67±2.52;11.67±3.51 vs24.00±8.19;18.00±3.00 vs26.00±5.57,P＜0.01),肝細(xì)胞排列整齊。<