內(nèi)毒素耐受對(duì)Galn-LPS誘導(dǎo)肝臟MAPK和STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響.pdf

1、目的：利用小鼠內(nèi)毒素耐受(endotoxintolerance，ETT)模型，探討ETT態(tài)對(duì)半乳糖胺/脂多糖(Galn/LPS)誘導(dǎo)急性肝損傷發(fā)生及Galn/LPS對(duì)肝臟MAPK和STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)1.雄性昆明小鼠66只，隨機(jī)分為三組，(1)對(duì)照組：腹腔注射0.9％NaCl0.2ml；(2)Galn/LPS組：腹腔注射(Galn13mg/LPS3μg)/只；(3)內(nèi)毒素耐受組(ETT)：連續(xù)三次間隔24小時(shí)腹腔

2、注射LPS2mg/kg，于LPS第三次注射24小時(shí)后腹腔注射Galn/LPS，劑量與Galn/LPS組相同。各組動(dòng)物分別于注射生理鹽水或Galn/LPS后0.5h(n=4)、1.5h(n=8)、6h(n=10)，在戊巴比妥鈉麻醉下經(jīng)眼內(nèi)眥采血、開(kāi)腹取肝，用于血漿ALT、肝臟MDA、TNF-α、GSH含量和GSH/GSSG測(cè)定。實(shí)驗(yàn)2.雄性昆明小鼠18只，隨機(jī)分為兩組，(1)對(duì)照組(n=8)：腹腔注射0.9％NaCl0.2ml；(2)內(nèi)毒

3、素耐受組(ETT，n=10)：LPS所用劑量及處理同實(shí)驗(yàn)一。兩組動(dòng)物于第三次鹽水或LPS注射24小時(shí)后，自小鼠尾靜脈注入按1∶5稀釋的印度墨汁，測(cè)定枯否細(xì)胞吞噬指數(shù)k及其校正值a。實(shí)驗(yàn)3.動(dòng)物和分組同實(shí)驗(yàn)1，分別于生理鹽水或Galn/LPS注射后0.5h(n=4)、1.5h(n=8)、6h(n=10)，在戊巴比妥鈉麻醉下開(kāi)腹取肝臟，用Westernblotting方法檢測(cè)肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STA

4、T3、SHIP和iNOS蛋白的表達(dá)，用放免法測(cè)定肝TNF-α含量。 結(jié)果：LPS預(yù)處理可明顯減輕Galn/LPS所致急性肝損傷，經(jīng)LPS預(yù)處理動(dòng)物血漿ALT活性和肝臟MDA含量明顯下降，而GSH含量、GSH/GSSG則升高。肝勻漿的TNF-α測(cè)定結(jié)果表明，損傷組TNF-α含量明顯高于對(duì)照組，ETT組TNF-α含量明顯低于肝損傷組(p＜0.05)。ETT對(duì)枯否細(xì)胞吞噬功能無(wú)明顯影響，與對(duì)照組相比吞噬指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)

5、。損傷組肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化表達(dá)顯著增強(qiáng)，p-MEK1/2、p-ERK1/2均在LPS刺激0.5h顯著升高，持續(xù)維持至6.0h，而p38MAPK蛋白則在LPS刺激0.5h后達(dá)到高峰，后逐漸下降至6.0h時(shí)維持基礎(chǔ)水平。STAT1和STAT3蛋白在Galn/LPS刺激后6.0h時(shí)肝臟STAT1和STAT3磷酸化表達(dá)增強(qiáng)。ETT組LPS預(yù)處理可顯著抑制肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STA