抗氧化應(yīng)激對脂多糖介導(dǎo)的肝臟和枯否細(xì)胞MAPK和STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、目的：探討抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)對脂多糖介導(dǎo)的急性肝損傷發(fā)生過程中肝臟和枯否細(xì)胞MAPK和STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)1.雄性昆明種小鼠54只隨機(jī)分為3組：(1)對照組(n=6)：腹腔注射0.9％NaCl0.2ml；(2)Galn/LPS組(n=24)：(Galn520mg+LPS120μg)/kg，i.p.；(3)NAC+Galn/LPS組(n=24)：NAC150mg/kg，連續(xù)灌胃3天；第3天灌胃后1h

2、腹腔注射GalN/LPS，劑量、分組和處理與Galn/LPS組相同。以上各組動(dòng)物分別于注射Galn/LPS或生理鹽水后0.5h、1h、2h和6h后，在戊巴比妥鈉麻醉下經(jīng)眼內(nèi)眥采血和開腹取肝，用于血漿ALT、肝MDA和GSH含量測定及肝臟病理組織學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)2.動(dòng)物和分組同實(shí)驗(yàn)1。(1)對照組(n=6)：0.9％NaCl0.2ml，i.p.；(2)LPS組(n=24)：LPS5mg/kg，i.p.；(3)NAC+LPS組(n=24)：NA

3、C150mg/kg，連續(xù)灌胃3天，第3天灌胃后1h，腹腔注射LPS5mg/kg，i.p.。分別于注射LPS或生理鹽水后0.5h、1h、2h和6h后，在戊巴比妥鈉麻醉下開腹取肝臟，甩Westernblotting方法檢測肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STAT3和HSP70表達(dá)，用放免法測定肝TNF-α含量。實(shí)驗(yàn)3.雄性昆明種小鼠40只分為3組，無菌分離枯否細(xì)胞(kupffercells，KCs)，培養(yǎng)24h后

4、，分為：(1)對照組(n=8)：直接收集KCs和培養(yǎng)基上清液；(2)LPS組(n=16)：DMEM培養(yǎng)基中加入100ng/mlLPS刺激0.5h或1h，收集KCs和培養(yǎng)基上清液；(3)NAC+LPS組(n=16)：用含NAC(10mmol/L)的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后，再加入含LPS(100ng/ml)的DMEM基培養(yǎng)刺激0.5h或1h,收集KCs和培養(yǎng)基上清液。KCsMEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STAT3

5、和HSP70表達(dá)及培養(yǎng)上清液中TNF-α含量檢測同實(shí)驗(yàn)二。 結(jié)果：NAC預(yù)處理可明顯減輕GalN/LPS所致急性肝損傷，經(jīng)NAC預(yù)處理動(dòng)物血漿ALT活性和肝臟MDA含量明顯下降，而GSH含量則升高。LPS刺激可使肝臟和枯否細(xì)胞的MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK的磷酸化表達(dá)顯著增強(qiáng)，p-MEK1/2、p-ERK1/2在LPS刺激0.5h達(dá)到高峰，2h后恢復(fù)至基礎(chǔ)水平，而p38MAPK則在LPS刺激0.5h后持續(xù)保持高磷酸

6、化水平。肝勻漿和KCs培養(yǎng)基的TNF-α水平亦明顯增高。STAT1和STAT3在LPS刺激0.5h后發(fā)生磷酸化，1h時(shí)達(dá)高峰并持續(xù)保持較高的磷酸化水平。NAC預(yù)處理可顯著抑制LPS所致肝臟或KCsMEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1和STAT3的磷酸化，與此同時(shí)，伴有肝臟或KCs培養(yǎng)基上清中TNF-α水平顯著降低。HSP70在LPS刺激0.5h時(shí)表達(dá)明顯高于對照組，1h后逐漸趨于正常水平。 結(jié)論：LPS介導(dǎo)KC