共刺激分子B7-H3在支氣管哮喘中的作用研究.pdf

1、第一部分:可溶性B7-H3在支氣管哮喘患兒血漿中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：研究支氣管哮喘患兒外周血中可溶性B7-H3（sB7-H3）的表達(dá)水平，并分析其與細(xì)胞因子水平的相關(guān)性，探討sB7-H3的異常表達(dá)在支氣管哮喘急性發(fā)作中的臨床意義。
　　方法：選取2012年1月～2012年12月在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科住院的支氣管哮喘患兒21例，并選取外科擇期手術(shù)（腹股溝斜疝、血管瘤、腺樣體肥大）而住院的患兒16例作為對(duì)照組兒童，

2、分為支氣管哮喘急性發(fā)作期組（A組）、恢復(fù)期組（B組）及對(duì)照組（C組）。同時(shí)采集支氣管哮喘患兒急性發(fā)作期及恢復(fù)期的外周血，以及外科擇期手術(shù)患兒的外周血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血漿中sB7-H3、IFN-γ、IL-4及IL-10的表達(dá)水平，及分析支氣管哮喘患兒急性發(fā)作期血漿中sB7-H3的水平與細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10的相關(guān)性。
　　結(jié)果：哮喘急性發(fā)作期組血漿中 sB7-H3的水平明顯高于恢復(fù)期組及對(duì)照

3、組（P<0.05），而恢復(fù)期組雖高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；哮喘急性發(fā)作期組血漿中IFN-γ、IL-10水平均低于恢復(fù)期組及對(duì)照組（P<0.05），恢復(fù)期與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；血漿中IL-4的水平在哮喘急性發(fā)作期組與恢復(fù)期組均高于對(duì)照組（P<0.05），且哮喘急性發(fā)作期組的表達(dá)水平高于恢復(fù)期組（P<0.05）。支氣管哮喘患兒急性發(fā)作期血漿中sB7-H3的表達(dá)水平與IL-4的水平具有正相關(guān)性，與IFN-γ、IL-10的水平無(wú)相關(guān)性。<

4、br>　　結(jié)論：sB7-H3在支氣管哮喘急性發(fā)作期異常高表達(dá)；sB7-H3可能通過(guò)增強(qiáng)Th2細(xì)胞因子的分泌而在支氣管哮喘的急性發(fā)作期起作用。
　　第二部分:抗B7-H3單克隆抗體對(duì)哮喘小鼠模型的作用研究
　　目的：探討抗B7-H3單克隆抗體對(duì)哮喘小鼠模型誘導(dǎo)期及效應(yīng)期的治療作用。
　　方法：6-8周齡雌性BALB/c小鼠（18-20g），隨機(jī)均分為5組，每組10只，分別為哮喘組（A組），生理鹽水對(duì)照組（B組），IgG組

5、（C組），抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組（D組），抗B7-H3抗體效應(yīng)期組（E組）。A、C、D、E組均給予OVA致敏及激發(fā)（0、10天給予OVA腹腔注射致敏，第20天給予OVA霧化吸入，每天半小時(shí)連續(xù)7天），C組、D組在第2，7，11，14，18天分別給予腹腔注射IgG、抗B7-H3抗體，E組在第2，7，11，14，18天給予腹腔注射IgG，第21，24，26天腹腔注射抗B7-H3抗體（OVA霧化1小時(shí)前注射）。B組給予同劑量生理鹽水注射、激

6、發(fā)。各組小鼠于末次激發(fā)2小時(shí)后麻醉處死，采集標(biāo)本。小鼠進(jìn)行肺泡灌洗，肺泡灌洗液（BALF）進(jìn)行細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù)；并采用ELISA測(cè)定小鼠BALF中的IFN-γ、IL-4、IL-17的水平；小鼠肺組織切片行HE染色、PAS染色及免疫組化法（SABC法），觀察肺組織炎性細(xì)胞及嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)情況、氣道粘液分泌情況及 B7-H3表達(dá)情況。
　　結(jié)果：哮喘組肺泡灌洗液（BALF）中的細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性細(xì)胞數(shù)多于生理鹽水對(duì)照組及抗B7-H

7、3抗體誘導(dǎo)期組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），哮喘組、IgG組、抗B7-H3抗體效應(yīng)期組BALF中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性細(xì)胞數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組BALF中的細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性細(xì)胞數(shù)高于生理鹽水對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。哮喘組、IgG組、抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組及抗B7-H3抗體效應(yīng)期組BALF中的IFN-γ的水平均低于生理鹽水對(duì)照組（P<0.05），哮喘組、IgG組、抗B7-H3抗體效應(yīng)期組I

8、FN-γ的水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組IFN-γ的水平高于IgG組（P<0.05）。哮喘組、IgG組、抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組及抗 B7-H3抗體效應(yīng)期組 BALF中的 IL-4、IL-17的水平均高于生理鹽水對(duì)照組（P<0.05），哮喘組、IgG組、抗B7-H3抗體效應(yīng)期組IL-4、IL-17水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組IL-4、IL-17水平低于IgG組（P<0.05）。肺組織病理染色顯示哮喘組、IgG組

9、、抗B7-H3抗體效應(yīng)期組炎性細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)及粘液分泌較抗 B7-H3抗體誘導(dǎo)期組明顯，生理鹽水對(duì)照組無(wú)明顯炎性細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)、粘液分泌。免疫組化顯示哮喘組、IgG組B7-H3高表達(dá)，生理鹽水對(duì)照組B7-H3不表達(dá)，抗B7-H3抗體誘導(dǎo)期組、抗B7-H3抗體效應(yīng)期組B7-H3部分表達(dá)。
　　結(jié)論：哮喘的誘導(dǎo)期給予抗B7-H3單克隆抗體治療能通過(guò)抑制Th2型細(xì)胞因子（IL-4）和 Th17型細(xì)胞因子（IL-17）的分泌，