共刺激分子B7-H3、B7-H4和ILT4在非小細胞肺癌中表達的研究.pdf

1、原發(fā)性肺癌在許多工業(yè)化國家是主要的癌癥死亡原因，其中非小細胞肺癌(NSCLC)占75～80％，并且用常規(guī)療法很難治愈。為了尋求治療NSCLC的新方法，首先需要闡明腫瘤的發(fā)生機制。免疫反應的缺陷可以促進腫瘤的生長，糾正異常免疫是免疫治療的一條途徑。本研究采用RT-PCR和FACS流式細胞儀等方法對B7-H3、B7-H4和ILT4在人的肺腺癌細胞株(A549、H1299、H23、Wark)、人的肺鱗癌細胞株(U1752)和人的肺癌大細胞株(

2、U1810)中的mRNA和蛋白表達進行了分析； RT-PCR擴增的片斷用2％的GTG瓊脂糖凝膠分離和獲取，并將其克隆和測序；Z采用免疫組化檢測B7-H3、B7-H4和ILT4在NSCLC病人肺癌組織中的表達水平，分析它們的表達與臨床參數(shù)之間的關系。更重要的是，也分析了B7-H3、B7-H4和ILT4在腫瘤細胞上的表達水平與腫瘤浸潤型淋巴細胞間的關系，為闡明非小細胞肺癌發(fā)生和轉移的分子機制提供了新的理論，為臨床肺癌的診斷、防治和新藥開發(fā)

3、尋找新的靶目標提供了理論根據(jù)。 一、關于B7-H3和B7-H4主要有以下發(fā)現(xiàn) 1.人肺癌細胞株中B7-H3和B7-H4 mRNA的表達 通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)，6種肺癌細胞株都表達B7-H3 mRNA；然而，B7-H4轉錄產物僅在A549細胞株中表達，其它細胞株不表達。 2．人肺癌細胞株膜表面B7-H3和B7-H4蛋白的表達 通過FACS分析發(fā)現(xiàn)，這些細胞株的細胞膜表面均表達B7-H3，

4、且平均熒光強度很高；但所有的細胞株上均檢測不到B7-H4的表達。 3．一個新的B7-H4 mRNA的剪接形式通過RT-PCR和瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，細胞株A549的B7-H4有兩條帶，其中一條501bp的短帶在正常外周血和單核細胞源性樹突狀細胞中沒有出現(xiàn)。將其克隆并測序。基因庫提供其序列數(shù)據(jù)，其存取碼為：Bankit729346。根據(jù)人B7-H4(CCDS：894.1)，501bp的短帶是由B7-H4 mRNA的一個剪接形式所產生

5、的，它缺乏編碼Ig C結構域的CDS3，命名為dv-B7-H4。 4．B7-H3和B7-H4在人NSCLC標本中的表達 在多數(shù)標本中，B7-H3和B7-H4兩種分子在腫瘤細胞上的表達形式是彌漫性的。細胞膜和/或胞漿內均有表達。病灶中浸潤性淋巴細胞不表達B7-H3和B7-H4。 70例標本中，B7-H3陽性占37.1％(26/70)；B7-H4陽性42.9％(30/70)。B7-H3和B7-H4的表達呈明顯的正相關

6、性(R<'2>=0.419；p<0.0001)。 5．NSCLC標本中B7-H3和B7-H4的表達與TILs的相關性 在26例B7-H3陽性標本中，TILs的數(shù)量為23.41±16.84，而44例B7-H3陰性表達標本中，TILs為33.98±14.55，兩者相比，有顯著性統(tǒng)計學差異(p=0.0081)。另外，B7-H4陽性標本的TILs為23.93±13.36，明顯低于B7-H4陰性標本中的TILs(33.17±16.

7、29，p=0.0174)。 6.B7-H3和B7-H4的表達與臨床參數(shù)的相關性 B7-H3或B7-H4的表達強度與臨床參數(shù)之間的關系：鱗癌組B7-H3陽性的比例(44.7％，17/38)高于腺癌組(28.1％，9/32)；腺癌組B7-H4陽性占50％(16/32)，鱗癌組占36.8％(14/38)；但統(tǒng)計學上均無顯著性差異。沒發(fā)現(xiàn)其它因素(年齡、性別、吸煙史或分化程度)與B7-H3或B7-H4的表達有關。 在有淋

8、巴結轉移的56例標本中，21例高表達B7-H3，23例高表達B7-H4。在14例未發(fā)生淋巴結轉移的病人中，僅1例高表達B7-H3，1例高表達B7-H4。B7-H3或B7-H4的表達與淋巴結轉移高度有關(p分別=0.046，0.023)。 二、關于ILT4主要有以下發(fā)現(xiàn)： 1．ILT4 mRNA在肺癌細胞株中的表達 通過RT-PCR發(fā)現(xiàn)，6種肺癌細胞株中，有三種細胞株：H1299、A549和U1810，表達ILT4

9、 mRNA，其它細胞株不表達。 2．ILT4蛋白在肺癌細胞株上的表達 FACS分析結果提示，僅有兩個細胞株：H1299和A549的膜表面表達ILT4。 3．ILT4在NSCLC標本中的表達 免疫組化結果提示，正常肺組織不表達ILT4，ILT4在腫瘤細胞上的表達形式是散在的，在細胞膜和/或胞漿內都有表達，病灶周圍的漿細胞和部分纖維母細胞也有表達。 40例NSCLC標本中，ILT-4陽性表達1

10、4例，占35.5％，ILT4在腫瘤細胞中的表達與其臨床參數(shù)包括淋巴結轉移均未發(fā)現(xiàn)相關性。 4．ILT4的表達與TILs的相關性 在14例ILT4陽性標本中，TILs的數(shù)量為26.82±20.22，而26例ILT4陰性表達標本中，TILs為37.11±14.35，兩者相比，有顯著性統(tǒng)計學差異(p<0.01)。 總之，B7-H3、B7-H4和ILT4在NSCLC組織中表達，它們的表達強度與TILs的浸潤呈負