重組ADAMTS13減輕腦缺血后應(yīng)用tPA所致的腦出血.pdf

1、背景:腦中風(fēng)是導(dǎo)致成人殘疾和死亡的主要原因。其中，缺血性腦中風(fēng)是中風(fēng)最常見的一種類型，是一種突然起病的腦血液循環(huán)障礙性疾病。目前為止，針對(duì)腦中風(fēng)還沒有特定的藥物治療。組織型纖溶酶原激活劑tPA是一種高度特異的絲氨酸蛋白酶，因其具有強(qiáng)大的溶栓作用而用于治療腦中風(fēng)，但tPA的治療時(shí)間窗僅為3h。并且，tPA是迄今為止應(yīng)用于臨床實(shí)踐的唯一的血栓溶解劑。然而，tPA在發(fā)揮強(qiáng)大的溶栓作用的同時(shí)，還伴隨著一些副作用如神經(jīng)毒性作用、加重腦水腫等。血性

2、轉(zhuǎn)化，即腦出血，是腦中風(fēng)后臨床上應(yīng)用tPA治療一個(gè)主要的并發(fā)癥。越來越多的證據(jù)表明，腦中風(fēng)后血管性血友病因子vWF在血栓的形成和微循環(huán)障礙中起著關(guān)鍵性的作用，而vWF裂解酶ADAMTS13可減輕腦缺血所致的損傷。基于此，本研究的主要目的是:明確rADAMTS13是否可以減輕腦中風(fēng)后應(yīng)用tPA所致的腦出血，從而增加tPA溶栓治療的安全性。
　　方法:我們采用單側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞的方法(MCAO)建立局灶性缺血/再灌注模型，缺血時(shí)間為4

3、5min。渥曼青霉素(Wortmannin)和法舒地爾（Fasudil）作為本實(shí)驗(yàn)研究的工具藥物。首先，我們通過往正常非缺血小鼠的側(cè)腦室注射tPA、vWF、tPA和rADAMTS13、vWF和rADAMTS13，來檢測(cè)其對(duì)BBB通透性的影響。然后，在小鼠缺血/再灌注模型上進(jìn)一步明確rADAMTS13對(duì)tPA所致的BBB破壞和腦出血的作用。缺血24h后，我們采用westen blotting來檢測(cè)各個(gè)處理組(vehicle，tPA，tPA

4、+rADAMTS13，rADAMTS13)腦組織中與腦出血相關(guān)的分子的表達(dá)情況，采用免疫組化的方法來觀察腦組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF的表達(dá)量和表達(dá)部位。
　　結(jié)果:往正常非缺血小鼠顱內(nèi)注射tPA或vWF可使BBB的通透性顯著增加，而rADAMTS13則能阻斷tPA引起的BBB的開放。缺血/再灌注后，靜脈給予tPA可加重BBB的破壞程度，而rADAMTS13可減弱tPA的這一毒性作用。相對(duì)應(yīng)的，應(yīng)用rADAMTS13后，tPA所

5、致的腦出血和神經(jīng)功能缺失也得到明顯的改善。在研究中，我們還發(fā)現(xiàn)rADAMTS13可抑制tPA介導(dǎo)的VEGF在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)，并且VEGF的表達(dá)也可被RhoA抑制劑Wortmannin和Akt抑制劑Fasudil所抑制。此外，rADAMTS13可使tPA誘導(dǎo)的RhoA和pAkt的表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論:腦缺血后tPA溶栓治療可破壞BBB的完整性，從而誘發(fā)腦出血;rADAMTS13通過抑制RhoA/Akt介導(dǎo)的VEGF通路保護(hù)BBB的