外源性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞減輕小鼠腦出血后炎癥并改善長(zhǎng)期神經(jīng)功能預(yù)后.pdf

1、目的：
　　1、探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植對(duì)腦出血小鼠的腦保護(hù)作用。
　　2、研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植后腦出血小鼠腦組織中炎癥細(xì)胞因子的變化，并探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腦出血炎癥反應(yīng)中的可能保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、免疫磁珠兩步法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。健康雄性昆明小鼠采用自體血注入法建立左側(cè)基底節(jié)區(qū)腦出血模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分

2、為假手術(shù)組、腦出血組、PBS對(duì)照組（腦出血+與Tregs等體積的PBS靜脈注射）、Tregs治療組（Tregs靜脈注射），PBS、Tregs于模型制作后2小時(shí)股靜脈輸注。分別于模型制作前1h和制作后2h測(cè)各組小鼠動(dòng)脈血壓及血?dú)?血腫掃描并常規(guī)HE染色大體觀察;分別于模型制作后的第1d、3d、7d、14d、21d、28d5個(gè)時(shí)間點(diǎn)給予行為學(xué)評(píng)分，觀察神經(jīng)功能缺損;在術(shù)后1d、3d、7d干濕重法測(cè)定腦組織含水量。
　　2、免疫磁珠兩步

3、法提取健康成年昆明小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。健康雄性昆明小鼠采用自體血注入法建立左側(cè)基底節(jié)區(qū)腦出血模型，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦出血組、PBS對(duì)照組（腦出血+與Tregs等體積的PBS靜脈注射）、Tregs治療組(Tregs靜脈注射)，PBS、Tregs于模型制作后2小時(shí)股靜脈輸注。各組動(dòng)物于造模后第1d、3d、7d時(shí)斷頭取新鮮腦組織，生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定腦組織勻漿液中炎性細(xì)胞因子IL-6、TN

4、F-α、IL-1β的表達(dá)水平;于造模后第3d時(shí)斷頭取腦，制備腦組織石蠟切片，免疫組織熒光方法染色檢測(cè)血腫周圍腦組織中炎癥因子IL-6、核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、各組動(dòng)物術(shù)前1小時(shí)與術(shù)后2小時(shí)的動(dòng)脈血壓及血?dú)夥治鼋Y(jié)果無(wú)顯著差異。假手術(shù)組未見(jiàn)明顯神經(jīng)功能缺損;腦出血組、PBS對(duì)照組神經(jīng)行為缺損前三天較重，且第3d時(shí)最差，以后逐漸恢復(fù)，與假手術(shù)組相比，1d、3d、7d、14d、21d時(shí)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

5、＜0.05);與腦出血組、PBS對(duì)照組相比，Tregs治療組在1d、3d、7d、14d、21d時(shí)功能缺損明顯減輕（P＜0.05），至21d時(shí)與假手術(shù)組相比較差異已無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;腦出血組、PBS對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)差異不明顯。腦出血組、PBS對(duì)照組、Tregs治療組腦組織含水量在1d、3d、7d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于假手術(shù)對(duì)照組(P＜0.05），且第3天時(shí)最高;Tregs治療組在第1d、3d、7d時(shí)腦組織含水量低于PBS對(duì)照組及腦出血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義（P＜0.05）;腦出血組與PBS對(duì)照組間各時(shí)間點(diǎn)差別不顯著。
　　2、腦出血組、PBS對(duì)照組及Tregs治療組在1d、3d、7d時(shí)腦組織中炎癥因子含量均明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，且第3天時(shí)表達(dá)最高;在1d、3d、7d時(shí)，Tregs治療組炎癥因子含量明顯低于PBS對(duì)照組及腦出血組(P＜0.05）。與假手術(shù)組相比較，腦出血組、PBS對(duì)照組及Tregs治療組血腫周圍腦組織炎癥因子IL-6及核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB3表達(dá)在3d時(shí)

7、明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05); Tregs治療組表達(dá)量低于腦出血組、PBS對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植可減輕腦出血小鼠腦水腫，改善長(zhǎng)期神經(jīng)功能缺損，發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　2、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植可減少腦出血后小鼠血腫周圍腦組織中炎癥因子及核轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，可能通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)發(fā)揮腦保護(hù)作用，有望通過(guò)外源性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞