體內(nèi)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞維持小鼠同種異體心臟移植長期耐受.pdf

1、目的:自20世紀(jì)以來，臨床上心臟移植的一年生存率已經(jīng)達(dá)到90％，但是移植后的慢性排斥以及長期存活仍面臨巨大挑戰(zhàn)，日前臨床上所用的免疫抑制劑多數(shù)都必須終身用藥，從而會產(chǎn)生多種副作用，危害受者的健康，影響患者的生活質(zhì)量，所以如何誘導(dǎo)移植物的長期耐受是器官移植面臨的重大難題。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，在移植后誘導(dǎo)和維持免疫耐受方面發(fā)揮重要作用。其中，CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞(CD4+Foxp3+Treg)主要通過

2、細(xì)胞接觸發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，而CD4+IL-10+IL-4-T細(xì)胞(Tr1)主要通過分泌抑制性細(xì)胞因子IL-10發(fā)揮作用。本文首次在小鼠同種異體心臟移植模型中，研究通過體內(nèi)誘導(dǎo)上述兩種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞來維持移植物長期免疫耐受的方法和機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)采取頸部套管吻合術(shù)建立BalB/c小鼠到C57BL/6小鼠的同種異體心臟移植模型，術(shù)后單獨(dú)或者聯(lián)合給予雷帕霉素和重組細(xì)胞因子IL-10的處理，觀察不同用藥處理對移植物的生存期、移植物炎細(xì)胞浸

3、潤情況、移植物和血清炎癥因子分泌、淋巴細(xì)胞亞群比例等的影響，并結(jié)合混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)等體外實(shí)驗(yàn)分析調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群CD4+CD25+Foxp3+Treg和CD4+CD25-IL-10+IL-4Tr1分別在免疫耐受中的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　結(jié)果:在初次心臟移植模型中，我們發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)使用雷帕霉素僅有約50％小鼠可以長期存活，而聯(lián)合應(yīng)用雷帕霉素和重組細(xì)胞因子IL-10可以誘導(dǎo)100％的小鼠心臟移植的免疫耐受（＞100天）。在移植術(shù)后6天、30天

4、、100天進(jìn)行檢測，H&E結(jié)果顯示，聯(lián)合用藥組較其他組炎性破壞明顯降低。ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，血清中IL-2、INF-γ降低，IL-10顯著升高，移植物的real time PCR檢測細(xì)胞因子變化有相同的趨勢。流式結(jié)果顯示，在移植后早期（移植后30天），CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群在雷帕霉素單用組以及聯(lián)合用藥組都有明顯升高，但在100天檢測中，CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞亞群恢復(fù)正常水平，而CD4+CD25

5、-IL-10+IL-4-Tr1細(xì)胞亞群在檢測中一直處于較高水平?；旌狭馨图?xì)胞反應(yīng)檢測T細(xì)胞對供體抗原的再次應(yīng)答，可以發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥可以明顯抑制細(xì)胞增殖能力，對于第三方刺激（C3H小鼠）都表現(xiàn)出較高的增殖，組間無差異。
　　結(jié)論:雷帕霉素和重組細(xì)胞因子IL-10聯(lián)合給藥可以誘導(dǎo)CD4+Foxp3+Treg和Tr1兩種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群，這兩種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分別在不同時(shí)期發(fā)揮調(diào)節(jié)作用共同維持同種異體心臟移植的免疫耐受。該聯(lián)合用藥方案作為一種