肺炎克雷伯菌嗜鐵素基因攜帶情況與其感染A549細(xì)胞時NGAL的表達(dá)研究.pdf

1、第一部分肺炎克雷伯菌嗜鐵素基因攜帶情況分析
　　目的:研究重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨床分離的肺炎克雷伯菌株攜帶嗜鐵素基因的情況。
　　方法:隨機選取從我院臨床住院患者中分離的肺炎克雷伯菌株34株（血液13株，痰液21株），采用PCR法檢測菌株嗜鐵素基因的攜帶情況。
　　結(jié)果:34株菌株中，所有菌株均攜帶腸菌素(Ent)基因entB，9株(26.5％)攜帶耶爾森菌素(Ybt)基因fyuA，3株(8.8％)攜帶沙門菌素——

2、糖基化腸菌素(Gly-Ent)基因iroN，1株(2.9％)攜帶產(chǎn)氣菌素(Aer)基因iutA;所有菌株中，只含有Ent一種嗜鐵素基因的25株(73.5％)，同時含有其他非Ent嗜鐵素基因的9株(26.5％)，其中entB、fyuA均陽性者6株(17.6％)，entB、ybtS及iroN均陽性者2株(5.9％)，4種基因均陽性者1株(2.9％)。
　　結(jié)論:我院臨床分離的肺炎克雷伯菌攜帶的嗜鐵素基因以Ent基因為主，非Ent嗜鐵素

3、基因的檢出需引起注意。
　　第二部分肺炎克雷伯菌感染A549細(xì)胞時活性氧的產(chǎn)生上調(diào)NGAL的表達(dá)
　　目的:研究肺炎克雷伯菌(KP)感染A549細(xì)胞時，活性氧(ROS)的產(chǎn)生對A549細(xì)胞天然免疫蛋白——中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)表達(dá)的影響。
　　方法:將A549細(xì)胞株分5組進(jìn)行實驗:正常對照組，H2O2組，H2O2+維生素E(VE)組，KP組，KP+VE組。采用魯米諾化學(xué)發(fā)光法檢測各組活性氧水平;實

4、時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測A549細(xì)胞NGAL mRNA的表達(dá);Western-blot檢測A549細(xì)胞NGAL蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:KP組與陽性對照H2O2組ROS水平均較正常對照組升高，同時，兩組A549細(xì)胞NGAL mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)也較對照組升高，而兩組在加入抗氧化劑VE后，ROS水平都降低，相應(yīng)的，兩組A549細(xì)胞NGAL mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)也下降。
　　結(jié)論:肺炎克雷伯菌感染呼吸道A549