肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮細胞基因表達譜分析.pdf

1、肺炎克雷伯氏菌乳腺炎發(fā)病機制復(fù)雜，深入了解肺炎克雷伯氏菌與牛乳腺的相互作用及牛乳腺對肺炎克雷伯氏菌感染的免疫應(yīng)答機制，是預(yù)防和控制肺炎克雷伯氏菌乳腺炎發(fā)生的關(guān)鍵。牛乳腺上皮細胞是外來病原菌通過乳導(dǎo)管侵入牛乳腺后最先接觸的細胞，本論文采用一株急性牛乳腺炎分離的肺炎克雷伯氏菌與體外乳汁分離法培養(yǎng)的牛乳腺上皮細胞相互作用，采用普通光鏡、掃描電子顯微鏡、透射電子顯微鏡觀察了肺炎克雷伯氏菌與牛乳腺上皮細胞相互作用后細胞的形態(tài)學(xué)變化;采用Hoche

2、st染色和流式細胞術(shù)觀察肺炎克雷伯氏菌誘導(dǎo)牛乳腺上皮細胞凋亡情況;用Real-time PCR檢測感染肺炎克雷伯氏菌前后牛乳腺上皮細胞NOD1、NOD2、RIP2、TLR2、TLR4、TLR6、TLR9、IL-6、IL-8細胞因子的表達情況，用Real-time PCR和ELISA檢測IL-1β及TNF-α的表達情況;首次運用Illumina/Solexa深度測序技術(shù)對肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮細胞的數(shù)字基因表達譜變化進行了分析;NO

3、D1 siRNA載體的構(gòu)建進一步研究NOD1在牛乳腺上皮細胞抗肺炎克雷伯氏菌免疫中的作用。
　　結(jié)果:1.證明了肺炎克雷伯氏菌可以粘附侵襲牛乳腺上皮細胞，且可以誘導(dǎo)牛乳腺上皮細胞發(fā)生凋亡;2.牛乳腺上皮細胞感染肺炎克雷伯氏菌后NOD1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活，促進了炎性因子的表達;3.首次完成了肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮細胞前后轉(zhuǎn)錄組測序，發(fā)現(xiàn)664個差異性表達基因，包括536個上調(diào)基因和128個下調(diào)基因;對這些差異表達基因進行GO功