MMP-2及TIMP-2在子宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變進(jìn)展中的作用.pdf

1、宮頸癌(cervical cancer,CC)的發(fā)生是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，是由宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)進(jìn)展演變而來(lái)。探討CIN進(jìn)展的分子機(jī)制對(duì)宮頸癌的預(yù)防和治療都具有特別重要的意義。CIN是指宮頸癌前病變至原位癌的連續(xù)過(guò)程，依據(jù)宮頸上皮細(xì)胞不典型增生的程度分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)。腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)受多因素調(diào)節(jié)、多步驟的復(fù)雜過(guò)程：瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫離，穿過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)(extr

2、acelluar matrix，ECM)屏障、血管壁基底膜(basement membrane，BM)進(jìn)入血液循環(huán)，最后穿出血管壁進(jìn)入新宿主微環(huán)境形成轉(zhuǎn)移灶。瘤細(xì)胞可產(chǎn)生和(或)誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生多種蛋白酶降解ECM、血管壁BM，促進(jìn)浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallopmteinases，MMPs)是其中最為重要的一組，它為鋅依賴性內(nèi)切酶家族，幾乎能降解 ECM 中所有成分?；|(zhì)金屬蛋白酶-2 (matrix meta

3、lloproteinase-2,MMP-2)，又稱為明膠酶A，與乳腺癌、胃癌、直腸癌、腦膜膠質(zhì)瘤等多種腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用也逐步受到重視，但其臨床意義尚不明確。基質(zhì)金屬蛋白酶的組織抑制物(tissue inhibitor ofmatrix metalloproteinasesTIMPs)是MMPs的天然抑制劑，與MMPs結(jié)合可抑制其活性，也具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成等作用。TIMP-2是MMP-

4、2的天然抑制劑，與MMP-2形成1∶1復(fù)合物，通過(guò)結(jié)合及抑制MMP-2活性來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲。MMP-2與TIMP-2間的平衡在調(diào)節(jié)ECM穩(wěn)態(tài)中起重要作用，MMP-2FFIMP-2比率失衡是腫瘤惡變和轉(zhuǎn)移的重要原因。但MMP-2及TIMP-2在CIN各級(jí)中的表達(dá)情況，研究結(jié)果不完全一致，因而有必要進(jìn)一步探討。本研究采用CIN診斷明確的病理標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化方法，觀察MMP-2和TIMP-2蛋白在各級(jí)CIN中的表達(dá)情況。 研究目

5、的 研究基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)及其組織抑制物(TIMP-2)在CIN中的表達(dá)，探討其在CIN進(jìn)展中的作用。 材料與方法 1．標(biāo)本來(lái)源 選取深圳市第五人民醫(yī)院2005年12月～2006年12月活檢的CIN和柱狀上皮移位組織標(biāo)本51例?；颊吣挲g28-49歲，年齡平均(32.2±5.4)歲。所有病例術(shù)前均未實(shí)行放化療，資料完整，且經(jīng)病理證實(shí)。全部標(biāo)本經(jīng)10％福爾馬林固定，石蠟包埋?；颊咝g(shù)前HPV(HC

6、-2檢測(cè))均為陽(yáng)性。 2．實(shí)驗(yàn)分組 所選病例隨機(jī)分為4組：柱狀上皮移位組10例、CINⅠ組9例、CINⅡ組18例、CINⅢ組14例。 3．實(shí)驗(yàn)試劑 MMP-2單克隆抗體(CA4001，濃縮型，1∶40)購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。TMP-2多克隆抗體(即用型)，通用型SP試劑盒(即用型)、DAB試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。 4.免疫組化檢測(cè) 采用S-P法染色，切片常規(guī)脫

7、蠟水化后，加入過(guò)氧化物酶阻斷溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，抗原修復(fù)后加入第一抗體，4℃冰箱過(guò)夜后，加入生物素標(biāo)記的第二抗體，室溫下孵育后再加入鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶溶液，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片?？瞻讓?duì)照用PBS代替一抗，陽(yáng)性對(duì)照采用絨毛組織。 5.結(jié)果判斷 免疫組化染色結(jié)果按照盲法由一位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行判斷。光學(xué)顯微鏡下觀察并攝片，見(jiàn)細(xì)胞漿中出現(xiàn)明確的棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性信號(hào)。陽(yáng)性信

8、號(hào)采用Image-pro-plus 5.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，MMP-2和TIMP-2免疫反應(yīng)產(chǎn)物的標(biāo)記用光密度(A)表示，在鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野系統(tǒng)自動(dòng)隨機(jī)測(cè)定3個(gè)不同的部位，提取陽(yáng)性細(xì)胞，測(cè)定MMP-2和TIMP-2的A值。 6.統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布者用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，正態(tài)數(shù)據(jù)多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用最小顯著差異法(LSD，Leas

9、t significant Difference)檢驗(yàn)，非正態(tài)數(shù)據(jù)兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，采用pearson進(jìn)行相關(guān)分析，取P<0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.MMP-2、TIMP-2在柱狀上皮移位及CIN中的表達(dá) MMP-2在柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組中的平均光密度值(A)分別為：0.018±0.004，0.025±0.008，0.034±0.011，0.047

10、±0.013。T1MP-2在柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組、CIN ⅡN、CIN Ⅲ組中的平均光密度值(A)分別為：0.075±0.011，0.084±0.015，0.088±0.013，0.106±0.025。MMP-2的表達(dá)在CIN Ⅲ組高于柱狀上皮移位組、CIN Ⅰ組及ClN Ⅱ N(P<0.05)，在CIN Ⅱ組高于柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組(P<0.05)，柱狀上皮移位組與CIN Ⅱ組之間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。T

11、IMP-2的表達(dá)在CIN Ⅲ組高于柱狀上皮移位組、CIN Ⅰ組及CINⅡ組(P<0.05)，柱狀上皮移位組、CIN Ⅰ組及CIN Ⅱ組各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.柱狀上皮移位及CIN中MMP-2/TIMP-2的光密度比值 MMP-2/TMP-2的光密度比值在柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組、CINⅡ組、CIN Ⅲ組中分別為：0.238±0.019，0.301±0.011，0.404±0.028，0.478±

12、0.021。MMP-2/TIMP-2的比值，在CIN Ⅲ組高于柱狀上皮移位組及CIN Ⅰ組(P<0.05)，在CIN Ⅱ組高于柱狀上皮移位組(P<0.05)，CIN Ⅲ組與CINⅡ組之間，CINⅡ組及CIN Ⅰ組之間，CIN Ⅰ組及柱狀上皮移位組之間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.MMP-2和TIMP-2在CIN中表達(dá)的相關(guān)性 在CIN組織中，隨著CIN分級(jí)的升高，MMP-2表達(dá)上調(diào)，TIMP-2的表達(dá)也上調(diào)，