酸性磷酸酶在子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景:
　　目前,子宮頸癌是女性第二常見的惡性腫瘤。全世界每年有約50萬的新發(fā)子宮頸癌病例,且每年有大于25萬患者死于子宮頸癌。其中80％以上發(fā)生在發(fā)展中國家,這些國家子宮頸癌的發(fā)生率可達(dá)80/100000人。子宮頸癌的病因至今尚未完全明了,目前認(rèn)為子宮頸癌的發(fā)生與早婚、早育、多產(chǎn)及性生活混亂等多方面因素有關(guān)。高危型人乳頭瘤病毒(Human papillomaviruses,HPV)持續(xù)感染和子宮頸癌的發(fā)生有明確相關(guān)性,幾乎所

2、有子宮頸癌患者都可以檢測(cè)到高危型HPV DNA。子宮頸癌的發(fā)生過程一般需經(jīng)歷子宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的過程,一般認(rèn)為子宮頸病變從CIN到子宮頸癌的過程需5-10年,如果能及早的發(fā)現(xiàn)癌前病變或子宮頸癌,就能大大提高子宮頸癌患者的治愈率。目前臨床上對(duì)子宮頸癌的篩查主要是通過細(xì)胞學(xué)和病毒學(xué)檢測(cè),但仍有一部分患者被遺漏,所以尋找到一個(gè)子宮頸病變過程中的新的生物學(xué)標(biāo)記物成為如

3、何更加準(zhǔn)確的提高子宮頸病變的診斷率的一個(gè)重要目標(biāo)。
　　酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP)是一種在酸性環(huán)境下能水解磷酸酯類的水解酶,分為5種亞型,其中和人體相關(guān)的有ACP1、ACP2、ACP3和ACP5。ACP3最早被看作前列腺癌的特異性腫瘤標(biāo)記物,在前列腺癌的診斷和監(jiān)測(cè)預(yù)后方面有重要意義;ACP5主要存在于破骨細(xì)胞內(nèi),它的高表達(dá)一般提示惡性腫瘤發(fā)生了骨轉(zhuǎn)移,然而近年來的研究表明,ACP不僅僅存在于人前列腺組織

4、,也有研究提出了骨腫瘤、乳腺癌等其他腫瘤中ACP的高表達(dá)。尚有文獻(xiàn)報(bào)道,異常的子宮頸鱗狀上皮細(xì)胞溶酶體內(nèi)ACP活性增高,但ACP在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況目前報(bào)道很少且表達(dá)亞型尚不明確。因此,本課題期望通過在不同水平檢測(cè)ACP在子宮頸病變中的表達(dá)情況,了解ACP異常表達(dá)或激活在子宮頸癌診斷中的意義,提出一種能提高子宮頸癌早期診斷率的新的輔助診斷指標(biāo)。
　　目的:
　　通過在不同水平檢測(cè)ACP在正常子宮頸上皮、子宮頸上皮內(nèi)

5、瘤變及子宮頸癌組織中的表達(dá)情況,提出一項(xiàng)能提高子宮頸癌早期診斷率的新的輔助診斷指標(biāo)。
　　方法:
　　1)RT-PCR明確ACP四種亞型在正常子宮頸上皮、子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌組織中的表達(dá)情況,篩選出和子宮頸癌相關(guān)的ACP亞型;
　　2)采用Western blot法檢測(cè)ACP1在正常子宮頸上皮和子宮頸病變上皮組織中的表達(dá)情況;
　　3)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)ACP1蛋白正常子宮頸上皮和子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮

6、頸癌組織中的表達(dá)差異;
　　4)不同水平檢測(cè)子宮頸鱗狀細(xì)胞癌Siha及C33A細(xì)胞株中ACP1的表達(dá)差異;
　　5)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)正常子宮頸腺體和子宮頸腺癌組織中ACP1的表達(dá)差異;
　　6)在核酸和蛋白質(zhì)水平上檢測(cè)子宮頸鱗狀細(xì)胞癌Siha細(xì)胞株和子宮頸腺癌Hela細(xì)胞株中ACP1的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)RT-PCR結(jié)果提示ACP1在正常子宮頸上皮、子宮頸上皮內(nèi)瘤變及子宮頸癌組織中呈規(guī)律表達(dá),且

7、和正常子宮頸上皮相比,病變子宮頸組織中ACP1表達(dá)升高,ACP2和ACP5在子宮頸組織中表達(dá)無規(guī)律,ACP3在子宮頸組織中不表達(dá);
　　(2)Western blot結(jié)果提示ACP1在正常子宮頸上皮及子宮頸病變上皮均有表達(dá),但正常子宮頸上皮中表達(dá)甚少,隨著子宮頸病變級(jí)別的增加ACP1的表達(dá)逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p<0.05;
　　(3)免疫組化結(jié)果提示ACP1定位于子宮頸上皮細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi),且隨子宮頸病變程度增加,表達(dá)量

8、明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p<0.05;
　　(4)RT-PCR和Western blot結(jié)果提示ACP1mRNA和ACP1蛋白在Siha、C33A細(xì)胞株中表達(dá)量無明顯差異,p>0.05;
　　(5)免疫組化結(jié)果提示ACP1定位于子宮頸腺癌腺管柱狀上皮細(xì)胞漿中,和正常子宮頸腺體相比,表達(dá)升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,p<0.05;
　　(6)RT-PCR和Western blot結(jié)果提示ACP1在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌Siha細(xì)