微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)增強(qiáng)HepG2細(xì)胞TRPV通道的功能響應(yīng)性.pdf

1、制備了微柱名義直徑為4μm或10μm，名義間距為4μm或7μm，名義高度為4μm的聚二甲基硅氧烷微柱陣列型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底，研究了HepG2細(xì)胞與拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底復(fù)合后細(xì)胞瞬時(shí)受體電位通道TRPV1、TRPV4在基因和蛋白水平的表達(dá)及其功能響應(yīng)性。細(xì)胞TRPV1和TRPV4在基因水平表達(dá)的評(píng)價(jià)采用定量PCR技術(shù)進(jìn)行；TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達(dá)以免疫印跡和免疫熒光染色確認(rèn)；TRPV1和TRPV4功能響應(yīng)性的研究系以TRPV1和TRPV

2、4激動(dòng)劑辣椒素和4α-佛波醇-12,13-二葵酸酯刺激細(xì)胞，采用鈣離子染料鈣綠-1結(jié)合激光共聚焦顯微技術(shù)記錄鈣內(nèi)流動(dòng)態(tài)過程，以鈣內(nèi)流熒光響應(yīng)幅度及陽性響應(yīng)比率進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，HepG2細(xì)胞接種于4種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底較之于平面基底上出現(xiàn)明顯的形態(tài)鋪展和極化程度變化。四種拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上細(xì)胞TRPV1和TRPV4的mRNA表達(dá)量均顯著高于平面基底上相應(yīng)值。且相同微柱間距(4μm、7μm)，較大微柱直徑(10μm)的基底促進(jìn)細(xì)胞

3、鋪展，同時(shí)伴隨著較高的TRPV1或TRPV4基因表達(dá)水平；相同微柱直徑(4μm或10μm)，較小微柱間距(4μm)的基底一定程度促進(jìn)細(xì)胞鋪展，但卻伴隨著較低的TRPV1或TRPV4基因表達(dá)水平。免疫印跡實(shí)驗(yàn)證實(shí)了TRPV1和TRPV4在蛋白水平的表達(dá)，且拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上TRPV1和TRPV4免疫熒光染色強(qiáng)度較之平面基底相應(yīng)值明顯增高或趨于增高。在激動(dòng)劑作用下，TRPV1介導(dǎo)的鈣內(nèi)流表現(xiàn)為快速去敏感化(25秒內(nèi))的瞬態(tài)內(nèi)流，且拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基底上