緩衰口服液對缺血性腎病中“低氧-微血管荒廢-腎纖維化”病理鏈影響的研究.pdf

1、研究背景:以動脈粥樣硬化性腎動脈狹窄(atherosclerotic renal artery stenosis，ARAS)為主的缺血性腎病，是引起終末期腎臟病（ESRD）的重要病因。其進展的主要機制是伴隨著動脈粥樣硬化、內皮損傷過程的微血管荒廢、低氧導致的小管-間質纖維化?，F(xiàn)行的藥物優(yōu)化治療(Optimal medicine treatment，OMT)并不能夠完全阻止患者ESRD的發(fā)生，而血管重建并沒有表現(xiàn)出對OMT的優(yōu)勢，因此探討

2、中醫(yī)藥治療ARAS有著重要的現(xiàn)實意義。我們既往對其中醫(yī)病機、證候進行了研究，并且臨床上選用益氣活血祛利濕的益腎緩衰方治療ARAS，初步的臨床試驗表明該方能夠延緩ARAS患者腎功能的進展。本研究就是基于與以往的臨床工作開展中醫(yī)藥治療ARAS深層次的研究。
　　目的:本研究對益腎緩衰方治療ARAS機制進行探討，通過緩衰口服液對ARAS小鼠的腎臟低氧誘導因子（Hypoxia-Inducible Factor，HIF-1α）和小管上皮細胞

3、轉化生長因子（transforming growth factor-β，TGF-β）等表達的影響，探討該方對ARAS的腎臟低氧-微血管荒廢-腎間質纖維化病理過程的影響機制。
　　方法:采用國際廣泛使用的動脈粥樣硬化模型—載脂蛋白E基因缺陷（ApoE-/-）小鼠行左側腎臟切除建立ARAS模型。將左側腎臟切除ApoE-/-小鼠分為緩衰口服液組、替米沙坦組、模型組，并設正常對照組（C57BL/6J野生型小鼠），術后2周開始給藥，共給藥1

4、2周。對所有小鼠進行眼球采血，進行腎功能和血脂檢測，比較組間差異。運用HE染色、Masson染色對左側腎臟切除ApoE-/-小鼠進行腎動脈組織學觀察，以及腎臟組織學觀察。應用RT-PCR檢測方法，評定益氣活血祛濕中藥（緩衰口服液）對實驗小鼠腎皮質組織中HIF-1α以及TGF-β表達的影響。運用免疫組織化學方法觀察各組小鼠腎臟α平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)、Ⅷ因子相關抗原(Von Willebra

5、nd factor，vWF)和Ⅳ型膠原的表達。Western-blot觀察腎臟組織血管內皮生長因子(Vascular endothelialgrowth factor，VEGF)的表達。
　　結果:
　　1、緩衰口服液對腎功能和血脂的影響:(1)血清肌酐和尿素氮:模型組與正常對照組相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，即模型組小鼠的腎功能較正常小鼠明顯下降。替米沙坦組與模型組相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明即經(jīng)過替

6、米沙坦治療后，小鼠的腎功能明顯好轉，替米沙坦治療有效。緩衰口服液組與模型組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明經(jīng)過緩衰口服液治療后，小鼠的腎功能明顯好轉，緩衰口服液治療有效。緩衰口服液組與替米沙坦組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，說明本次實驗中，兩組在降低血清肌酐和尿素氮上無明顯差異。(2)甘油三酯和總膽固醇:模型組與正常對照組小鼠血清TG、CHO差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，模型組小鼠的血清TG、CHO較正常小鼠明顯升

7、高。緩衰口服液組與模型組小鼠血清TG、CHO差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明緩衰口服液治療能明顯降低小鼠的血清TG、CHO。替米沙坦組與模型組TG、CHO差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、緩衰口服液對腎動脈和腎組織的影響:(1)腎動脈:光鏡下觀察模型組的腎動脈出現(xiàn)顯著的狹窄、內皮下有大量的泡沫細胞、嚴重者出現(xiàn)纖維斑塊及纖維帽。緩衰口服液組的腎動脈管腔狹窄程度明顯減輕。(2)腎組織:Masson染色:正常對照組腎間質

8、無腎小管的萎縮及間質的纖維化，無炎癥細胞的侵潤。模型組腎間質可見大量炎癥細胞灶狀分布，腎間質纖維化較明顯。替米沙坦組腎間質可見較多炎癥細胞灶狀分布，腎臟小管及間質的損害程度不明顯。緩衰口服液組腎間質可見少量炎癥細胞呈灶狀分布，腎臟損害程度不明顯。
　　3、RT-PCR檢測HIF-1α以及TGF-β表達:與正常對照組相比，模型組HIF-1a和TGF-β的表達明顯增高(P＜0.05);緩衰口服液組與模型組比較，HIF-1a和TGF-β

9、的表達減少(P＜0.05)。免疫組化檢測Ⅳ型膠原、α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、vWF的表達:緩衰口服液組與模型組比較，Ⅳ型膠原、α-SMA的表達減少，vWF表達增多，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Western-blot觀察腎臟組織VEGF的表達:與正常對照組比較，模型組VEGF表達明顯減少(P＜0.05);模型組較緩衰口服液組，VEGF減少(P＜0.05);緩衰口服液組與替米沙坦組比較，無統(tǒng)計學差異。
　　結論: