慢性馬兜鈴酸腎病TSP-1高表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化及微血管丟失的關(guān)系.pdf

1、研究背景：馬兜鈴酸(AA)是一種硝基菲羧酸化合物，主要包括結(jié)構(gòu)相似的馬兜鈴酸I和馬兜鈴酸II，主要存在于關(guān)木通、廣防己、青木香等中草藥中。1964年，國(guó)內(nèi)吳松寒最先報(bào)道了服用大劑量木通煎劑引起急性腎衰竭；而慢性腎衰竭病例卻為比利時(shí)學(xué)者1993年最先報(bào)告，系服用含有廣防己的減肥藥所致，因此，他們?cè)鴮⑦@種慢性腎損害稱為“中草藥腎病”(chinese herbs nephropathy)，而目前它的致病成分已清楚，故現(xiàn)在已將其統(tǒng)稱為“馬兜鈴酸

2、腎病”(Aristolochic acid nephropathy，AAN)。 根據(jù)AAN的臨床及病理表現(xiàn)，AAN至少可分成3型：急性AAN、腎小管功能障礙型AAN和慢性AAN(CAAN)。CAAN患者臨床呈慢性進(jìn)行性腎功能損害，病理表現(xiàn)為寡細(xì)胞性腎間質(zhì)纖維化。CAAN的發(fā)病機(jī)制尚未全部明白，存在多種觀點(diǎn)，主要有細(xì)胞毒假說(shuō)、腎缺血假說(shuō)及AA-DNA加合物假說(shuō)等，所以，對(duì)CAAN的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入研究很有必要。

3、很多證據(jù)顯示腎臟微血管的丟失與腎臟病進(jìn)展有關(guān)，尤其在殘余腎模型和老年腎模型中得到了證實(shí)，觀察到腎小管周圍毛細(xì)血管(PTC)的丟失程度與腎間質(zhì)纖維化的嚴(yán)重程度成正比。腎臟中血小板反應(yīng)因子-1(17SP-1)通過(guò)抑制血管內(nèi)皮增殖、促進(jìn)其凋亡所導(dǎo)致的PTC丟失，很可能是CAAN時(shí)腎間質(zhì)纖維化的一個(gè)重要機(jī)制。而且，TSP-1還是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(17GF-β1)的前體激活物，通過(guò)TSP-1-TGF-β軸變化，很可能也參與了CAAN腎間質(zhì)纖維化

4、進(jìn)程。因此，我們擬用CAAN大鼠模型，觀察PTC變化與TSP-1、TGF-β等因素變化的關(guān)系。 研究目的： 1．制作CAAN大鼠模型，觀察大鼠腎組織中PTC變化(用特異性毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體JGl2做免疫組化染色觀察)。 2．觀察CAAN中，PTC變化與TP-1、TGF-β1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及I型膠原(ColI)之間的相互關(guān)系。 研究方法: 36只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分

5、為2組，每組18只。模型組給予關(guān)木通浸膏水溶液間斷灌胃，初始劑量相當(dāng)于馬兜鈴酸20mg·kg<'-1>·d<'-1>，連續(xù)5天，休息9天，此后劑量減至相當(dāng)于馬兜鈴酸15mg·kg<'-1>·d<'->，隔周灌胃，直至第12周；正常對(duì)照組僅用相同體積的自來(lái)水，按上述時(shí)間灌胃。用藥至4、8和12周結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)選取大鼠6只，測(cè)體重，留取血、尿標(biāo)本供生化檢查，麻醉大鼠做腎灌洗，然后處死留取腎組織做病理及免疫組化檢查。采用鏈霉親和素一生物素．

6、辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SABC)技術(shù)，對(duì)腎組織中氨基肽酶P(APP)、TSP-1、FGF-β1、VEGF及ColI進(jìn)行染色，再用圖像分析儀對(duì)其進(jìn)行半定量測(cè)量，最后分析它們之間相關(guān)關(guān)系。 研究結(jié)果: 1．CAAN大鼠理化指標(biāo)及腎臟病理改變：模型組大鼠各周體重顯著低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)。各周血肌酐與體重比值(SCr/BW)和24小時(shí)尿蛋白定量顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。兩組大鼠均未出現(xiàn)尿糖。光鏡下模型組

7、大鼠逐漸出現(xiàn)腎小管變性、萎縮及間質(zhì)纖維化，第4周起間質(zhì)纖維化面積顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。電鏡下模型組大鼠見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞凋亡、微絨毛脫落、線粒體腫脹、溶酶體及吞噬泡增多；第4周起腎間質(zhì)出現(xiàn)膠原纖維，并逐漸增多。對(duì)照組大鼠無(wú)明顯改變。 2．CAAN大鼠腎組織免疫組化染色結(jié)果：模型組大鼠腎間質(zhì)．APP表達(dá)量進(jìn)行性減少，第4、8及12周時(shí)，均顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，提示CAAN模型大鼠PTC在4、8及12周逐漸減少

8、。模型組大鼠腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1、VEGF表達(dá)，及腎間質(zhì)TsP-1、ColI表達(dá)呈進(jìn)行性增加，第4、8及12周時(shí)，均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。相關(guān)分析顯示：在CAAN模型組大鼠中，①腎間質(zhì)TSP-1表達(dá)量與腎小管TGF-β表達(dá)量呈顯著正相關(guān)(r=0.925，P<0.01)，且兩者又均與腎間質(zhì)Col Ⅰ表達(dá)量呈顯著正相關(guān)(r=0.910、0.857，P<0.01)。②。腎間質(zhì)APP表達(dá)量與TSP-1及col Ⅰ表達(dá)量均呈顯著負(fù)