miRNAs作為多發(fā)性骨髓瘤的診斷和耐藥的標(biāo)志的臨床和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：評(píng)價(jià)異常表達(dá)的血清miRNAs是否可作為骨髓瘤的診斷標(biāo)志；分析miRNAs異常表達(dá)在骨髓瘤化療耐藥機(jī)制的作用；通過(guò)靶向抑制miRNAs的表達(dá)水平，探討以miRNA為靶點(diǎn)增加化療敏感性的可能性，進(jìn)一步分析其作用機(jī)制。
　　方法：用qRT-PCR法檢測(cè)4種miRNAs在初治骨髓瘤患者、治療后骨髓瘤患者與健康捐獻(xiàn)者的表達(dá)水平，同時(shí)還檢測(cè)了miR29a在連續(xù)觀察的骨髓瘤患者血清的表達(dá)情況。通過(guò)濃度梯度遞增法建立耐阿霉素的骨髓瘤細(xì)胞系

2、(RPMI8226/DOX),采用qRT-PCR法檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞耐藥前后miR155、FOXO3a及E-cadherin基因表達(dá)變化；通過(guò)Western blot方法檢測(cè)骨髓瘤耐藥細(xì)胞與敏感細(xì)胞中FOXO3a、BCL-2蛋白表達(dá)變化。轉(zhuǎn)染miR155抑制物和模擬物處理瘤細(xì)胞48h和72h，通過(guò)qRT-PCR法檢測(cè)miR155、FOXO3a及E-cadherin基因表達(dá)情況；應(yīng)用CCK8方法檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞增殖抑制的情況。在靶向抑制物干預(yù)骨

3、髓瘤細(xì)胞后，通過(guò)Western blot方法檢測(cè)FOXO3a、BCL-2通路蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：研究顯示，單獨(dú)檢測(cè)任何一個(gè)miRNA不能作為骨髓瘤的診斷標(biāo)志；而聯(lián)合檢測(cè)miR29a與miR155能明顯區(qū)分骨髓瘤患者與健康捐獻(xiàn)者，AUC為0.8739，敏感性為80.77％，特異性為83.33%。血清 miR29a的表達(dá)隨著化療的進(jìn)行而下降，與漿細(xì)胞數(shù)量和M蛋白水平變化相一致。miR155在骨髓瘤耐藥細(xì)胞表達(dá)水平上調(diào)最明顯，F(xiàn)

4、OXO3a、E-cadherin表達(dá)隨著耐藥性的增強(qiáng)反而減少，而B(niǎo)CL-2表達(dá)隨耐藥性的增強(qiáng)而增加。MiR155抑制物作用于RPMI8226耐藥細(xì)胞72h后，細(xì)胞增殖水平明顯下降，F(xiàn)OXO3a、E-cadherin表達(dá)增強(qiáng)，而B(niǎo)CL-2表達(dá)下降。MiR155抑制物能降低阿霉素對(duì)骨髓瘤耐藥細(xì)胞RPMI8226/DOX的IC50。
　　結(jié)論：1.異常表達(dá)的血清miRNAs可作為骨髓瘤的診斷標(biāo)志物，miR29a/miR155可作為骨髓瘤