頭孢妥侖膽汁排泄的分子機制及其對肝臟轉(zhuǎn)運蛋白調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：藥物轉(zhuǎn)運蛋白在藥物體內(nèi)代謝過程中的重要作用及研究價值越來越多地受到研究者的關(guān)注。Mrp2，Bcrp是位于肝細(xì)胞膽管側(cè)膜上的ABC族轉(zhuǎn)運蛋白，可轉(zhuǎn)運許多內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)（如藥物），許多藥物也可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)運蛋白的表達(dá)。頭孢妥侖是第四代頭孢菌素類抗生素，研究介導(dǎo)其膽汁排泄的肝臟藥物轉(zhuǎn)運蛋白，對預(yù)測與頭孢妥侖相關(guān)的藥物間相互作用及了解β-內(nèi)酰胺類抗生素的膽汁排泄機制有重要意義；了解藥物對藥物轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)情況的影響能夠使我們更清楚地從轉(zhuǎn)運

2、蛋白分子水平理解藥物的體內(nèi)動力學(xué)變化，從而為臨床合理用藥提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。本實驗通過in situ和in vivo方法研究參與頭孢妥侖膽汁排泄過程的藥物轉(zhuǎn)運蛋白及頭孢妥侖口服給藥后對肝臟主要轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響。 方法：采用肝灌流實驗方法，研究頭孢妥侖是否經(jīng)Mrp2、Bcrp或P-gp的轉(zhuǎn)運；采用RT-PCR和Western blot實驗，考察頭孢妥侖對肝臟主要轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響： （1）肝灌流實驗，設(shè)立對照組（頭孢妥侖

3、（1μM））和實驗組（頭孢妥侖（1μM）和丙磺舒（Mrp2抑制劑）、新生霉素（Bcrp抑制劑）或維拉帕米（P-gp抑制劑）（20μM）），灌流Wistar大鼠肝臟，在設(shè)定時間點收集出口灌流液和膽汁樣品，高效液相色譜法測定樣品中頭孢妥侖含量，考察實驗組和對照組中肝攝取率和膽汁累積排泄率的差別。 （2）大鼠灌胃給藥，設(shè)立對照組（生理鹽水）和頭孢妥侖16mg/kg，50mg/kg，100mg/kg三個不同的劑量組，每天兩次，一周后，取

4、肝臟，提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，檢測Mrp2，Bcrp，P-gp，Oct1和Oat2的mRNA的表達(dá)變化；（3）采用超速離心法提取膜蛋白Mrp2，運用Western blot方法測定不同劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)的變化，考察其變化是否有劑量依賴性。 結(jié)果： （1）肝灌流實驗結(jié)果表明，實驗組和對照組相比，肝攝取率變化無統(tǒng)計學(xué)意義上的差別；在丙磺舒抑制劑組，肝臟灌流25分鐘后，大鼠的頭孢妥侖膽汁累積排泄率降低至對照組

5、的43．78%；新生霉素組的膽汁累積排泄率降至對照組的79．52%；維拉帕米做P-gp抑制劑時，頭孢妥侖的膽汁累積排泄率與對照組相比，無統(tǒng)計學(xué)意義上的差別。 （2）大鼠灌胃給予頭孢妥侖一周后，Mrp2，Bcrp和Oat2 mRNA的表達(dá)增多，且100mg/kg劑量組mRNA表達(dá)明顯多于16mg/kg劑量組；P-gp和Oct1的mRNA表達(dá)減少，與頭孢妥侖劑量的增加呈反向變化。（3）Western blot與RT-PCR結(jié)果一致，

6、Mrp2蛋白表達(dá)增多，且100mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)是對照組的1．7倍，16mg/kg劑量組中Mrp2蛋白表達(dá)是對照組的1．32倍。 結(jié)論： （1）Mrp2在頭孢妥侖的膽汁排泄過程中起主要作用，Bcrp也參與其膽汁排泄過程，而P-gp不介導(dǎo)頭孢妥侖的膽汁排泄。 （2）頭孢妥侖可增加Mrp2，Bcrp和Oat2的mRNA表達(dá)，減少P-gp和Oct1的mRNA表達(dá)，且這種調(diào)節(jié)作用有劑量依賴性。 （