MDR1基因多態(tài)性對肝癌肝移植預后的作用研究.pdf

1、肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常見的肝臟惡性腫瘤,占全世界腫瘤發(fā)生率的第五位,全球每年約有37萬多患者被新診斷為肝細胞癌.經(jīng)過20多年的大力發(fā)展,肝移植已經(jīng)成為重要的根治性手段.然而,肝移植患者的長期存活欠佳使HCC肝移植成為全球移植界最富爭議的焦點問題之一.術后腫瘤復發(fā)正是影響患者長期生存的關鍵影響因素.如何及早有效預測肝移植術后腫瘤復發(fā)的風險,制定出合理的術前受體選擇標準已成當務之急.

2、 在相似的發(fā)病基礎以及治療條件下,由于個體差異性的存在導致病人之間的疾病預后各不相同,而基因多態(tài)性則是個體差異性研究中的熱點.最近一些研究表明多藥耐藥基因l(muhidrug resistarice gene l,MDRl)多態(tài)性基因型與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有密切的聯(lián)系.KlJrzawski等認為其與結腸癌發(fā)生相關;Stanulla等的報道則發(fā)現(xiàn),MDR1第3435位攜帶T等位基因的兒童急性淋巴細胞白血病(ALL)患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)治療

3、后的疾病復發(fā)率明顯低于其他基因型.然而,目前尚缺乏MDR1基因多態(tài)性對肝癌預后作用的相關研究,有關其與肝癌肝移植患者預后的關聯(lián)更是未見報道.本研究以中國人中MDRl基因最常見的單核苷酸多態(tài)性為切入點(包括C1236T,G2677A/T,C3435T),通過檢測肝癌肝移植患者MDRl基因上述位點的多態(tài)性,探討MDRl基因多態(tài)性與預后的相關性,從而為指導臨床及早預測腫瘤復發(fā)、建立更合理的肝癌肝移植受體選擇標準提供新的參考指標. 方法

4、: 選取2003年2月至2005年1月在本中心接受肝癌肝移植患者50例(均經(jīng)病理學確診為HCC肝移植患者),均獲得隨訪并納入本研究中.50例患者在肝癌診斷明確后接受肝移植術,術式均采用原位肝移植,供肝為尸肝.50例HCC肝移植患者的平均生存時間為16.1月,中位生存時間為16.3月(1-34.7月).其中39(78﹪)例病理組織學檢查證實其合并有肝硬化.術后免疫抑制劑采用以環(huán)孢霉素或他克莫司(FK506)為主的三聯(lián)方案;全組患者

5、術后未接受常規(guī)化療;移植患者術后進入隨訪程序,常規(guī)進行甲胎蛋白(AFP)監(jiān)測、B超、胸片及全身骨骼ECT等檢查. 取患者外周抗凝血分離單個核細胞,應用OIAamp DNA Kit(QIAGEN,德國)提取基因組DNA.采用PCR-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)法進行基因多態(tài)性分析.PCR反應體系共50μl,其中包括50 ng/μl基因組DNA 4μl,10×PCR緩沖液5μl,氯化鎂(1 mmol/L)4μl,dNTP

6、(200 μmmol/A)2μl,上下游引物(0.2μmmol/L)各2μl以及Taq酶(1 U/μ1)0/6 μl,余用雙蒸水補足.PCR反應的引物序列、PCR產(chǎn)物長度詳見表1.PCR反應過程如下:94℃預變性4 min后,94℃變性45 s、 54℃ (C1236T G2677A/T)或56℃ (C3435T)退火45 s、72℃延伸45 s,共循環(huán)34次,最后再72℃延伸10 min.取PCR產(chǎn)物6μl,加入1 U限制性內(nèi)切酶,在

7、20μl反應體系中37℃水浴過夜進行酶切反應.最后經(jīng)15﹪聚丙烯酰胺凝膠電泳后銀染判定結果.所有統(tǒng)計分析均采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行.x2(卡方)檢驗用于比較各基因型與腫瘤術后復發(fā)之間有無統(tǒng)計學差異.與無瘤以及總體生存率統(tǒng)計采用Kaplan-ACeie方法,組間差異采用Log-rank檢驗法比較.采用Forward方式的Cox比例風險模型進行多因素分析.P<0.05被認為有統(tǒng)計學差異. 結果: 根據(jù)酶切產(chǎn)物進行M

8、DRl基因分型,將50例研究對象分為術后肝癌復發(fā)和不復發(fā)兩組,兩組間MDRl G1236T、C3435T、G2677T的多態(tài)性分布無統(tǒng)計學差異.根據(jù)MDRl基因型將研究對象分成2677A攜帶型(AA+AT+GA)和2677A非攜帶型(TT+GT+GG)兩組.2677A攜帶與否在兩組間的分布差異則呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異(P<0.05). 統(tǒng)計學分析2677A攜帶情況與患者臨床資料的關系后顯示:2677A攜帶型與非攜帶型兩組之間在年齡、性別

9、、門靜脈癌栓、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、肝硬化背景、術前AFP水平和組織學分級上無統(tǒng)計學差異. 隨訪結果顯示:50例患者中20例死于復發(fā),8例復發(fā)后存活,22例存活且無復發(fā).其中12例2677A攜帶型患者中,存活且無復發(fā)者為9例;而38例2677A非攜帶型患者中,存活且無復發(fā)者僅為13例.2677A攜帶型和非攜帶型患者的1年生存率為91.7﹪和65.6﹪,1年無瘤生存率分別為83.3﹪和36.5﹪,前者的無瘤生存率顯著高于后者(P<0

10、.05),但總體生存率無顯著性差異(P>0.05).此外,單因素分析顯示,影響HCC肝移植患者術后無瘤生存率的變量有6項,即PVTT、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、術前AFP水平、組織學分級和12677A攜帶型.而影響總體生存率的變量有5項,即PVTT、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、術前AFP水平和組織學分級.上述因素行Cox逐步回歸分析結果顯示:術前AFP水平、腫瘤數(shù)量、PVTT和12677A攜帶型與無瘤生存率存在顯著相關. 結論: 1