基因多態(tài)性影響肝移植術后早期他克莫司代謝的機制研究.pdf

1、目的：
　　肝移植是治療終末期肝病最有效的手段，他克莫司（TAC，F(xiàn)K506）是肝移植患者術后免疫抑制治療方案的基礎用藥，但其目前存在治療窗窄、個體間藥物代謝動力學差異大等特點，并且與細胞因子、藥物代謝酶等相關基因的基因多態(tài)性有關。故本課題旨在探究基因多態(tài)性對肝移植術后早期他克莫司代謝的影響及其機制，以便篩選出TAC個體化用藥的遺傳標志物。
　　方法：
　　應用Sequenom MassARRAY基因分型技術檢測肝移植

2、供受體細胞色素P4503A亞家族多肽5（CYP3A5）、白細胞介素-6（IL-6）、Toll樣受體4（TLR4）等基因部分標簽SNP（單核苷酸多態(tài)性）位點的分布；回顧性調查并記錄肝移植患者術后4周內的臨床資料；分析供受體基因的SNP結果與TAC（FK506）濃度/劑量比值（C/D值）的相關性。采用熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)和免疫組織化學染色檢測供肝組織IL-6 mRNA和蛋白表達量；應用定點突變和穩(wěn)定轉染技術構建 IL-6 r

3、s1800796位點不同基因型 LO2肝細胞株（LO2C和LO2G），通過構建肝細胞缺氧復氧模型探究該位點SNP對肝細胞生物學功能影響。
　　結果：
　　供受體CYP3A5 rs776746位點、供體TLR4 rs1927907位點以及供體IL-6 rs1800796位點SNP與TAC代謝密切相關（P<0.05），并且在蛋白和mRNA水平上，TAC快代謝組供肝組織IL-6表達量高于慢代謝組（P<0.05）。缺氧復氧6小時后，

4、與LO2G基因型細胞株相比，LO2C細胞株的AST表達量低，而IL-6和STAT3表達增加更加明顯，細胞活性更高（P<0.05）。
　　結論：
　　本課題驗證了供受體CYP3A5 rs776746位點SNP與TAC代謝相關，還新發(fā)現(xiàn)供體IL-6 rs1800796位點和供體TLR4 rs1927907位點SNP影響肝移植術后早期TAC代謝。其中在體外實驗中證實IL-6 rs1800796位點SNP影響肝細胞缺氧復氧（H/R）