POR-28基因多態(tài)性對(duì)免疫抑制劑他克莫司臨床個(gè)體差異影響的研究.pdf

1、目的：通過對(duì)中國(guó)健康志愿者及腎移植患者免疫抑制劑他克莫司藥動(dòng)學(xué)的研究，考察CYP450氧化還原酶*28（POR*28）基因多態(tài)性對(duì)CYP3A介導(dǎo)的他克莫司代謝個(gè)體差異的影響以及該基因多態(tài)性在中國(guó)腎移植患者他克莫司群體藥動(dòng)學(xué)模型中的作用；并探討遺傳因素與腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)（AR）發(fā)生的關(guān)聯(lián)性，為他克莫司的臨床個(gè)體化治療提供依據(jù)。
　　方法：（1）71例簽署知情同意書的男性健康志愿者口服2mg他克莫司，采集服藥前及服藥后的0.25

2、，0.5,1,1.5,2，3,4,6,8,10,12,16,24h各時(shí)間點(diǎn)全血樣，采用UPLC-MS/MS法測(cè)定他克莫司全血藥物濃度，非房室模型分析他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；
　?。?）回顧性收集腎移植術(shù)后長(zhǎng)期以他克莫司為基礎(chǔ)免疫抑制劑治療的患者83例（男60例，女23例），其中，腎移植術(shù)后一年內(nèi)出現(xiàn)急性排斥反應(yīng)（AR）患者13例（男11例，女2例），詳細(xì)收集患者的臨床基本資料以及血藥濃度監(jiān)測(cè)資料；
　?。?）應(yīng)用NONMEM軟件

3、對(duì)腎移植患者群體進(jìn)行他克莫司群體藥動(dòng)學(xué)研究，估算患者藥動(dòng)學(xué)參數(shù)和個(gè)體間、個(gè)體內(nèi)變異。定量考察人口學(xué)特征、肝功能、合并用藥及POR、CYP3A4、CYP3A5基因多態(tài)性等變量對(duì)他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響。并采用自舉法（Bootstrap）對(duì)最終模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　?。?）采用PCR-RFLP法測(cè)定CYP3A4*1G及CYP3A5*3基因型，直接測(cè)序法分析POR*28基因。
　　結(jié)果：（1）在健康志愿者（n=71）和腎移植患者（n=

4、83）中POR*28、CYP3A4*1G、CYP3A5*3等位基因頻率分別為29.6%、22.5%、73.2%與39.8%、31.3%、66.3%，患者人群等位基因頻率與健康人群基因頻率分布比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　?。?）71例健康志愿者POR*28基因多態(tài)性對(duì)CYP3A介導(dǎo)的他克莫司代謝的影響的研究顯示：志愿者CYP3A4*1G、CYP3A5*3基因多態(tài)性與他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的個(gè)體差異密切相關(guān)（P<0.05）；PO

5、R*28基因多態(tài)性對(duì)他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而根據(jù)CYP3A基因分型后結(jié)果顯示：在CYP3A5表達(dá)者中， POR*28CT基因型志愿者的AUC0-24，AUC0-∞及Cmax分別46.7±24.9 ng.mL-1.h-1,57.3±33.9 ng.mL-1.h-1及11.2±6.1 ng.mL-1，顯著低于 POR*28CC攜帶者（71.5±38.9 ng.mL-1.h-1,94.3.3±58.3 ng.m

6、L-1.h-1及17.6±9.8 ng.mL-1；P值均小于0.05）；但是該基因多態(tài)性與 CYP3A5不表達(dá)者的他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)個(gè)體差異無關(guān)，對(duì)不同CYP3A4*1G基因型志愿者藥動(dòng)學(xué)參數(shù)亦無影響。
　?。?）POR*28基因突變對(duì)83例腎移植患者他克莫司初期C0/D的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而通過對(duì) CYP3A5基因分類后的分層分析顯示，該多態(tài)性僅僅影響CYP3A5表達(dá)者的他克莫司代謝，在CYP3A5表達(dá)者中POR

7、*28CC攜帶者C0/D為POR*28CT者的1.42～1.75倍（P<0.05），是 POR*28TT型患者的1.78～2.21倍（P<0.01）。與健康志愿者的結(jié)果相似，POR*28基因多態(tài)性與CYP3A5不表達(dá)者的他克莫司C0/D無關(guān)，對(duì)不同CYP3A4*1G基因型患者他克莫司藥動(dòng)學(xué)也無影響。
　?。?）NONMEM法對(duì)83例腎移植患者的246份血藥濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，選用穩(wěn)態(tài)最小濃度法擬合基礎(chǔ)模型。最終模型中篩選到影響患者表

8、觀清除率（CL/F）的協(xié)變量CYP3A5-POR組合基因型，而患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)特征（年齡、性別、體重等）、肝功能（ALT）、合并用藥（強(qiáng)的松）及CYP3A4*1G基因型對(duì)CL/F無影響。最終模型中CL/F的群體典型值為23.3 L.h-1，而攜帶CYP3A5*1-POR*28T型個(gè)體CL/F為24.2 L.h-1,是CYP3A5*1-POR*28CC型患者CL/F的1.25倍(CL/F=19.3 L.h-1, P<0.05)，是CYP3

9、A5*3/*3攜帶者CL/F的1.62倍(CL/F=14.9 L.h-1, P<0.01)。CL/F的個(gè)體間變異由基礎(chǔ)模型的34.8%下降為26.3%。自舉法驗(yàn)證模型較穩(wěn)定。
　　（5）患者的基因多態(tài)性與腎移植后 AR發(fā)生率的相關(guān)性研究結(jié)果顯示：CYP3A5*1/*1攜帶者在移植后1年內(nèi)AR的發(fā)生率顯著高于CYP3A5*3/*3者（40.0%VS.8.1%, P<0.05），而其他基因的多態(tài)性與AR發(fā)生無關(guān)。
　　結(jié)論：（1

10、）在健康志愿者和腎移植患者中，POR*28基因突變均使CYP3A5表達(dá)者他克莫司體內(nèi)的代謝增加，但該基因多態(tài)性并不影響 CYP3A5不表達(dá)者的他克莫司代謝，對(duì)不同CYP3A4*1G基因型患者藥動(dòng)學(xué)參數(shù)亦無影響。他克莫司藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的個(gè)體差異與患者CYP3A4*1G、CYP3A5*3、POR*28基因多態(tài)性密切相關(guān)。
　　（2）患者表觀清除率（CL/F）與CYP3A5-POR組合基因型密切相關(guān)，可為腎移植患者在臨床上個(gè)體化使用他克莫司