山東省腎綜合征出血熱流行病學(xué)研究.pdf

1、腎綜合征出血熱(Hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)在我國也被稱作流行性出血熱(Epidemic hemorrhagic fever，EHF)，是由漢坦病毒(Hantavirus，HV)引起的在臨床上以高熱、出血和腎功能損害為特征，嚴(yán)重危害人類健康的自然疫源性疾病。中國是世界上HFRS發(fā)病最高的國家，累計(jì)發(fā)病100多萬，每年報(bào)告病例占全球90﹪以上，疫區(qū)發(fā)病率在3.5/10萬左右，流行期

2、間病死率高達(dá)30﹪，該病在我國分布范圍廣、疫區(qū)類型復(fù)雜，已成為危害人民健康和生命安全的重點(diǎn)傳染病之一。山東省1962年在濟(jì)寧魚臺(tái)縣發(fā)現(xiàn)首例病人，隨后病例散在發(fā)生，1975年后疫情呈逐年上升趨勢，1986年發(fā)病達(dá)最高峰，全年報(bào)告發(fā)病41443人，發(fā)病率為53.69/10萬，約占當(dāng)年全國總報(bào)告發(fā)病人數(shù)的50﹪。之后，我省HFRS報(bào)告發(fā)病人數(shù)，一直居全國首位，總發(fā)病人數(shù)占全國發(fā)病人數(shù)的1/3。 HFRS在山東每隔10年左右出現(xiàn)一次流行

3、高峰，前兩次流行高峰分別出現(xiàn)在1986年和1995年。按照此規(guī)律，下一個(gè)流行高峰可能會(huì)在近年出現(xiàn)。研究表明近幾年來山東省HFRS發(fā)病開始出現(xiàn)一些波動(dòng)，進(jìn)入不穩(wěn)定期。因此有必要對(duì)山東省HFRS流行病學(xué)特征進(jìn)行調(diào)查，并在此基礎(chǔ)上對(duì)HV分離株基因變異情況等進(jìn)行研究，這將對(duì)該病的有效預(yù)防與控制具有重要的意義。 二、研究目的 1.闡明山東省1994-2006年HFRS發(fā)病和死亡病例的時(shí)間、地點(diǎn)和人群分布特征。 2.分析山東

4、省HFRS宿主動(dòng)物的種類構(gòu)成、生態(tài)學(xué)特征、小獸密度和帶毒情況。 3.分析山東省HV核苷酸序列特征及其進(jìn)化關(guān)系，HV亞型分布及其與其它毒株的基因同源性。 4．探討HV快速診斷和基因分型方法。 三、研究方法 1．人間疫情分析山東省1994．2006年HFRS疫情數(shù)據(jù)來自山東省疾病預(yù)防控制中心(CDC)疫情報(bào)告資料，2．宿主動(dòng)物分析3．分子流行病學(xué)研究 四、主要研究結(jié)果 1．人間疫情1994．2

5、006年山東省HFRS發(fā)病呈現(xiàn)下降趨勢，發(fā)病和死亡都有明顯的春季和秋冬季高峰，近年來發(fā)病和死亡秋峰略有升高且出現(xiàn)時(shí)間略有提前，自2003年起病死率明顯上升，2005年達(dá)到1.11﹪。山東省HFRS主要發(fā)生在魯中南山區(qū)，2001-2006年與1994-2000年相比，魯東南丘陵地區(qū)所占比例有所增加，魯西北平原所占比例則明顯下降。1995-2006年山東省HFRS發(fā)病男性占67-21﹪，女性占32.79﹪，性別比例為2.05：1；死亡病例中

6、男性占71.82﹪，女性占28.18﹪，性別比例為2.55：1，近年來男性發(fā)病稍有增高，而女性死亡有所增高。山東省HFRS以20.59歲人群發(fā)病為高，占全部發(fā)病的79.61﹪，近年來50歲以上年齡組人群發(fā)病和死亡所占比例升高。各種職業(yè)中，農(nóng)民發(fā)病和死亡最多，分別占81.55﹪和82.84﹪。 2．宿主動(dòng)物1994-2006年山東省居民區(qū)主要以褐家鼠(59.58﹪)和小家鼠(32.39﹪)為優(yōu)勢鼠種，野外主要以黑線姬鼠(32.39

7、﹪)、褐家鼠(26.65﹪)和大倉鼠(22.68﹪)為優(yōu)勢鼠種，居民區(qū)和野外鼠種構(gòu)成有顯著性差異(X<'2>=3356．588，P=0.000)。分1994-2000和2001-2006時(shí)間段來看，2001-2006年居民區(qū)小家鼠所占比例上升，褐家鼠下降，而野外黑線姬鼠比例下降，褐家鼠比例上升。從生態(tài)群落空間分布來看，魯中南山區(qū)群落的多樣性(0.6870)最高，魯東南丘陵地區(qū)群落的均勻度(0.7038)最高，膠萊平原的多樣性(0.433

8、7)和均勻度(0.4949)均最低。1994-2006年共檢測9種9848只動(dòng)物，肺HV抗原陽性318只，小獸帶毒率為3.23﹪，其中褐家鼠225只，占70.75﹪；小家鼠42只，占13.21﹪；黑線姬鼠29只，占9.12﹪：大倉鼠10只，占3.14﹪；背紋倉鼠和鼩鼱各6只，各占1.89﹪。1994-2006年居民區(qū)與野外鼠帶毒率有顯著性差異(X<'2>=11.147，P=0.001)。小獸密度、小獸帶毒率和帶毒指數(shù)的季節(jié)性比較強(qiáng)，隨著

9、季節(jié)的變化而上下波動(dòng)，其中有春季和秋季兩個(gè)高峰。1994-2006年小獸密度3月和9月比較高，分別達(dá)2.97﹪和3.23﹪，形成兩個(gè)高峰。1994-2000年小獸帶毒率春峰比較明顯，高達(dá)5.61﹪，秋冬峰不明顯；2001-2006年春峰和秋冬峰均較明顯，分別為5.98﹪和5.94﹪。 3.HV分子流行病學(xué)研究結(jié)果 3.1 IFA共檢測鼠肺標(biāo)本572份，其中20份HV抗原陽性，2份來自黑線姬鼠，其余18份均來自褐家鼠。

10、 3.2 MacELISA 48份病人血清經(jīng)檢測，35份陽性，陽性率為72.92﹪ 3.3 RT Nested：PCR 23份HFRS患者的血清中，15份擴(kuò)增結(jié)果為陽性，2份只被HTN型引物擴(kuò)增，13份只被SEO型引物擴(kuò)增。20份經(jīng)IFA檢測為陽性的鼠肺經(jīng)擴(kuò)增后，16份為陽性，其中1份黑線姬鼠鼠肺只被HP1、HP2擴(kuò)增， 15份褐家鼠鼠肺只被SP1、SP2擴(kuò)增。HTN型片段大小約為383bp，SEO型片段大小約為418bp。

11、 3.4序列測定結(jié)果經(jīng)測序獲得22株HV部分核苷酸序列(2003nt-2302nt)，其中11株來自HFRS病人血清，1株為HTN型，10株為SEO型；11株來自褐家鼠鼠肺，均為SEO型。 3.5序列分析結(jié)果1984-2006年山東省HV同源性在67.1﹪-100﹪之間，HTN型HV的同源性在78.1﹪-98.7﹪之間，SEO型HV的同源性在93.7﹪-100﹪之間。山東省HTN型HV至少存在H2、H5、H9三個(gè)亞型，沒

12、有優(yōu)勢亞型，SEO型至少存在S2、S3兩個(gè)亞型，S3為優(yōu)勢亞型，其中實(shí)驗(yàn)分離株SDP2和SDP12均為新發(fā)現(xiàn)亞型H5亞型和S2亞型。山東省人源和鼠源SEOV的同源性經(jīng)t檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(人源SEOV：96.89﹪±1.64﹪；鼠源SEOV：97.92﹪±1.11﹪。t=-3.02，P=0.003)。山東省HV亞型分布具有一定的地理聚集性，魯中南山區(qū)HV亞型分布最復(fù)雜。 3.6 PCR/SSCP結(jié)果48份HFRS病人血清經(jīng)RT N

13、ested PCR擴(kuò)增得到41份陽性結(jié)果，其中發(fā)病1周內(nèi)血清擴(kuò)增陽性率為100﹪。PCR產(chǎn)物經(jīng)SSCP分析，呈現(xiàn)2種不同的圖譜：33份具有相同的SSCP圖譜，與標(biāo)準(zhǔn)株R22株相同，屬SEO型；而另8份則與HTN76-118株具有相同的SSCP圖譜，屬HTN型。 五、結(jié)論 1.1994-2006年山東省HFRS發(fā)病呈現(xiàn)下降趨勢，秋季發(fā)病相對(duì)增多，從2003年開始病死率明顯上升。HFRS高發(fā)區(qū)逐漸由魯西北向魯東南移動(dòng)。HFR

14、S50歲以上年齡組發(fā)病和死亡所占比例升高，女性死亡病例增多。 2．1994-2006年山東省居民區(qū)內(nèi)小家鼠所占比例升高，褐家鼠下降，而野外黑線姬鼠比例下降，褐家鼠比例上升。魯中南山區(qū)小獸群落多樣性最高，魯東南丘陵地區(qū)均勻性最高。居民區(qū)與野外小獸帶毒率差異顯著，春季和秋冬季帶毒率均有不同程度升高。 3．山東省HFRS疫區(qū)是以家鼠型為主的家鼠型和姬鼠型混合型疫區(qū)，HTN型HV至少存在H2、H5、H9三個(gè)亞型，SEO型HV至少

15、存在S2、S3兩個(gè)亞型，H5亞型和S2亞型為首次在山東省發(fā)現(xiàn)。山東省HTN型HV亞型較分散，沒有優(yōu)勢亞型，而SEO型HV的亞型主要集中于S3亞型。 4．山東省HTN型HV變異比SEO型大，SEO型HV在相對(duì)穩(wěn)定遺傳的基礎(chǔ)上也在持續(xù)不斷變異，人源SEOV的同源性比鼠源SEOV的同源性低。山東省HV亞型分布具有一定的地理聚集性，魯中南山區(qū)HV亞型分布最復(fù)雜。 5．RT-Nested PCR用于HFRS患者早期血清標(biāo)本的檢測陽

16、性率較之MacELISA高，特別對(duì)1周內(nèi)的血清，陽性率可達(dá)100﹪。RT-Nested PCR結(jié)合SSCP、法可應(yīng)用于HV分型，操作簡便、迅速，可一次分析大量標(biāo)本，值得對(duì)其進(jìn)一步研究。 六、意義和創(chuàng)新 本研究描述了山東省1994-2006年HFRS的三間分布和宿主動(dòng)物特征，揭示了HFRS流行現(xiàn)況的動(dòng)態(tài)變化。研究了山東省HV核苷酸序列特征及其進(jìn)化關(guān)系，首次報(bào)道山東省HV存在H5亞型和S2亞型，并證明山東省人源SEOV的同源