LPS刺激下肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Angll受體表達(dá)與功能的研究.pdf

1、目的：用放射配體結(jié)合分析法(RLBA)檢測內(nèi)毒素(LPS)刺激下人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HPMEC)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)一型受體(AT1-R)功能。 方法：濃度為100ng/ml的LPS刺激體外培養(yǎng)接種于24孔板的HPMEC8小時；0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、4.0fmol/ml八個不同濃度的放射性配體<'125>Ⅰ-AngⅡ分別加入不同的板孔中，終體積為0.5ml，每個濃度設(shè)3個平行孔；孵育2小時

2、，洗脫三次后γ計數(shù)儀計數(shù)，測定AT1-R的總結(jié)合；另設(shè)上述平行孔，每孔加入5μgAngⅡ用于非特異性結(jié)合測量；由于總放射計數(shù)(TL)=總結(jié)合計數(shù)(TB)+游離放射配體計數(shù)(F)，總結(jié)合計數(shù)=特異性結(jié)合計數(shù)(SB)+非特異性結(jié)合計數(shù)(NSB)，由此可得到游離放射配體計數(shù)與特異性結(jié)合計數(shù)；繪制AT1-R飽和曲線，特異性結(jié)合曲線，游離結(jié)合曲線與Scatchart曲線。 結(jié)果：隨放射性配體<'125>Ⅰ-AngⅡ加入量的增加，非特異性結(jié)

3、合也相應(yīng)逐漸增加，且由直線相關(guān)與回歸分析得到非特異性結(jié)合增加與加入<'125>Ⅰ-AngⅡ劑量呈直線關(guān)系(R<'2>=0.9929)；Scatchart作圖得B/F與B呈直線關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R<'2>=0.9514，反應(yīng)親和力的Kd值為109pmol/5×10<'5>細(xì)胞，從Scatchart曲線與X軸截距得到AT1-R的最大結(jié)合位點Bmax為29pmol/5×10<'5>細(xì)胞；AT1-R飽和曲線分為兩段，前段斜率較大，后端較為平坦，在

4、<'125>Ⅰ-Ang Ⅱ在1600pmol/5×10<'5>細(xì)胞到2000pmol/5×10<'5>細(xì)胞之間TB的增加與NBS增加基本相當(dāng)，特異性結(jié)合隨<'125>Ⅰ-AngⅡ的增加變化不明顯，故能使AT1-R飽和的<'125>Ⅰ-AngⅡ劑量為1600pmol/5×10<'5>細(xì)胞。 結(jié)論:LPS刺激下HPMEC的AT1-R與AngⅡ結(jié)合屬于高親和力結(jié)合，RLBA能得到AT1-R的Bmax，可用于LPS刺激下HPMEC的AT