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文檔簡介
1、本論文以法夫酵母(Xanthophyllomycesdendrorhous)為出發(fā)菌株,以本研究室發(fā)明專利的生產(chǎn)技術(shù),發(fā)酵生產(chǎn)低聚糖,對該低聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,并對發(fā)酵過程中的酶初步分離,研究其性質(zhì)。 測定發(fā)酵液的酶活,其具有一定的糖苷酶活力。對發(fā)酵液中糖類物質(zhì)高效液相色譜分析表明,發(fā)酵液中可能存在新科斯糖。以蔗糖為底物,發(fā)酵液為酶源進(jìn)行酶解反應(yīng)(溫度18℃,pH6.5),酶解產(chǎn)物的高效液相色譜分析表明其中蔗糖含量降低,新科斯糖
2、的含量增加,并同時伴隨有葡萄糖和果糖的產(chǎn)生,初步說明發(fā)酵液中的產(chǎn)糖酶具有果糖基轉(zhuǎn)移作用。 采用高效液相NH2制備柱對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行純化制備,收集其中的一種主要的低聚糖,對其進(jìn)行質(zhì)譜和13C核磁共振分析,解析兩譜圖表明,該低聚糖的分子量為504Da,其結(jié)構(gòu)為.β-D-呋喃果糖(2→6)-a-D-吡喃葡萄糖(2→1)-β-D-呋喃果糖,即為新科斯糖。 采用硫酸銨沉淀,AKTA蛋白純化層析系統(tǒng)(DEAESpheroseFF層析柱
3、)層析對發(fā)酵液中的酶進(jìn)行初步分離,研究酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明,該酶分子量約為70542Da,酶解反應(yīng)的最適溫度范圍為18~30℃,且該溫度范圍內(nèi)酶活穩(wěn)定,隨著溫度的升高,酶活力迅速下降,60℃完全失活。其最適pH為6.5,pH5-6.5范圍內(nèi),酶活力穩(wěn)定。研究了部分化學(xué)物質(zhì)對酶活力的影響,其中K+(2mmol/L)對酶活力幾乎沒有影響,甚至具有激活作用;ca2+和Mg2+(2mmol/L)對酶活力影響不大,zn2+和.Al3+(2mmol/
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