胍基化聚乙烯亞胺非病毒轉(zhuǎn)基因載體.pdf

1、跨膜屏障是非病毒轉(zhuǎn)基因載體在基因轉(zhuǎn)染中面臨的主要障礙。為了設計一種可有效跨越細胞膜屏障的轉(zhuǎn)基因載體，本文將胍基引入支化聚乙烯亞胺，制備了胍基化聚乙烯亞胺非病毒載體。瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠(EB)置換實驗表明胍基化聚乙烯亞胺可有效復合DNA，但在一定程度上削弱了載體和DNA之間的相互作用。透射電鏡下，胍基化聚乙烯亞胺/DNA復合物呈球狀分散粒子，且當復合比大于臨界復合比時，其粒徑均小于150納米。Zeta電位實驗表明胍基化聚乙烯亞胺/D

2、NA復合物表面帶正電荷，且胍基化后載體的Zeta電位有所降低。以熒光素酶為報告基因考察胍基化聚乙烯亞胺載體對非洲綠猴腎(COS-7)細胞的基因轉(zhuǎn)染，結果表明與未改性聚乙烯亞胺相比，胍基化聚乙烯亞胺有著更高的轉(zhuǎn)染效率和更低的細胞毒性。藥物抑制實驗揭示，凹陷蛋白介導的細胞內(nèi)吞作用對胍基化聚乙烯亞胺載體的高效表達起關鍵作用。同時，利用反式環(huán)己二醇所具有的非特異性打開核孔的獨特作用，將反式環(huán)己二醇與胍基化載體體系相結合，結果顯示載體效率有了進一