啟膈散、通幽湯、沙參麥冬湯、補(bǔ)氣運(yùn)脾湯不同洗脫部位調(diào)節(jié)人食管癌細(xì)胞EC9706分泌蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、　　目的：過觀察啟膈散、通幽湯、沙參麥冬湯和補(bǔ)氣運(yùn)脾湯不同乙醇濃度的洗脫部位調(diào)節(jié)人食管癌細(xì)胞 EC9706 增殖抑制作用、細(xì)胞周期和分泌型蛋白 MMP1、MMP11、PCSK9、TREM2、IGFPB3、STX1A 表達(dá)作用,篩選對(duì)食管癌細(xì)胞有效作用部位,以期揭示研究食管癌證方不同有效部位治療食管癌作用分子機(jī)制,探討食管癌證候相關(guān)分子病機(jī)。
　　方法：1.用啟膈散、通幽湯、沙參麥冬湯和補(bǔ)氣運(yùn)脾湯水提物通過大孔吸附樹脂 D101

2、,并用純水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和無水乙醇進(jìn)行梯度洗脫,得到食管癌四證方不同濃度乙醇洗脫部位。2. MTT 法檢測啟膈散、通幽湯、沙參麥冬湯和補(bǔ)氣運(yùn)脾湯不同濃度乙醇洗脫部位對(duì)細(xì)胞 EC9706增殖影響,尋找四證方各部位對(duì)細(xì)胞作用最明顯的洗脫部位,測定這些部位的量效時(shí)效關(guān)系。3.倒置顯微鏡觀察有效部位對(duì)細(xì)胞抑制作用明顯的洗脫部位對(duì)食管癌 EC9706 細(xì)胞形態(tài)的影響。4.流式細(xì)胞術(shù)測定有效部位對(duì)食管癌細(xì)胞 EC9706 細(xì)胞

3、周期的影響。5.Werstern-blot 法檢測四方有效洗脫部位調(diào)節(jié)細(xì)胞分泌型蛋白表達(dá)的作用。
　　結(jié)果：1.啟膈散、通幽湯、沙參麥冬湯和補(bǔ)氣運(yùn)脾湯水提物經(jīng)大孔吸附樹脂D101用不同濃度的醇進(jìn)行梯度洗脫,得到不同乙醇濃度的洗脫部位。四方的出膏率大小順序相同,純水洗脫部位>30%乙醇洗脫部位>50%乙醇洗脫部位>70%乙醇洗脫部位>無水乙醇洗脫部位。2.MTT法測定食管癌四證方不同濃度乙醇洗脫部位對(duì)EC9706細(xì)胞增殖影響發(fā)現(xiàn)

4、,啟膈散30%乙醇洗脫部位、通幽湯和沙參麥冬湯50%乙醇洗脫洗脫部位、補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水乙醇洗脫部位對(duì)人食管癌EC9706細(xì)胞增殖有明顯抑制作用,且隨藥物濃度增加,抑制細(xì)胞增殖呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系。3.倒置顯微鏡下觀察啟膈散30%乙醇洗脫部位、通幽湯和沙參麥冬湯50%乙醇洗脫洗脫部位、補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水乙醇洗脫部位抑制EC9706細(xì)胞生長增殖作用明顯,增長緩慢。啟膈散30%醇洗脫部位組細(xì)胞間接觸松散,細(xì)胞呈現(xiàn)變圓,少量細(xì)胞固縮呈圓形或卵圓形且

5、透亮；通幽湯50%醇洗脫部位組細(xì)胞生長較分散,細(xì)胞形態(tài)影響不大；沙參麥冬湯50%醇洗脫部位作用組細(xì)胞皺縮,透光度減低；補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水醇洗脫部位作用組細(xì)胞變圓,細(xì)胞間隙增大,漂浮的死細(xì)胞較多。4.啟膈散30%乙醇洗脫部位組和補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水乙醇洗脫部位組組G0/G1期細(xì)胞比率有所上升；通幽湯和沙參麥冬湯50%乙醇洗脫部位作用的EC9706細(xì)胞G0/G1期比率降低；而各藥物組S 期細(xì)胞比率均降低；各藥物組G2/M期細(xì)胞比率升高,其中沙參麥冬湯

6、50%乙醇洗脫洗脫部位部位組G2/M期細(xì)胞比率升高顯著。5.運(yùn)用Western-blot檢測食管癌細(xì)胞EC9706內(nèi)29種分泌型蛋白的表達(dá),可檢測到MMP1、MMP11、PCSK9、TREM2、IGFPB3、STX1A蛋白分子表達(dá),啟膈散30%乙醇洗脫部位能夠抑制MMP1、MMP11、TREM2、IGFPB3的表達(dá),通幽湯50%乙醇洗脫部位能夠抑制STX1A的表達(dá),沙參麥冬湯50%乙醇洗脫部位能夠抑制MMP1、PCSK9、TREM2、

7、IGFPB3、STX1A的表達(dá),補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水乙醇部位能夠抑制MMP11、MMP11 PCSK9 TREM2 IGFPB3 STX1A的表達(dá)
　　結(jié)論：食管癌證方不同濃度洗脫物對(duì)食管癌細(xì)胞 EC9706 的生長均有一定抑制作用,其中啟膈散 30%乙醇洗脫部位、通幽湯和沙參麥冬湯 50%乙醇洗脫部位、補(bǔ)氣運(yùn)脾湯無水乙醇洗脫部位抑制作用最明顯。上述四個(gè)有效部位抑制細(xì)胞 EC9706 增殖作用機(jī)制與細(xì)胞周期阻滯于 G0/G1期或 G