黃芪提取物干預(yù)食管癌細(xì)胞Ec9706-cDDPpolβ的研究.pdf

1、食管癌是一種起源于食管上皮的惡性腫瘤，臨床上鱗癌多見(jiàn)，近年來(lái)腺癌、未分化癌及其他類型癌亦有增多趨勢(shì)，本病在全世界惡性腫瘤病種中都屬常見(jiàn)，在我們中國(guó)以河南、河北為首的某些省份以及江蘇、山西、陜西等省份的局部地區(qū)，食管癌的年新發(fā)病人數(shù)以及死亡人數(shù)在各類惡性腫瘤中也一直居高。對(duì)人們的健康生存構(gòu)成極大威脅，并成為了患者及其家庭成員重大的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。但基于食管癌早期癥狀的不典型性，往往疾病進(jìn)展期才獲得臨床干預(yù)，治療手段變得單一，這使得化療在本

2、病治療中的地位日益凸顯。然而隨著化學(xué)治療藥物應(yīng)用的普及，近年來(lái)腫瘤耐藥性也逐漸為人們所重視。這也成了臨床治療能否持續(xù)有效的主要影響因素。造成腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物低反應(yīng)性的原因多樣且復(fù)雜，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)腫瘤耐藥機(jī)制及其逆轉(zhuǎn)方法進(jìn)行了大量研究，這也為克服腫瘤細(xì)胞耐藥提供了除開(kāi)發(fā)新型抗癌藥物外的新方向，即尋找能夠逆轉(zhuǎn)化療耐藥的逆轉(zhuǎn)劑。近年來(lái)研究者漸漸發(fā)現(xiàn)并關(guān)注到DNA聚合酶β在化療低敏腫瘤細(xì)胞中的異常表達(dá)。國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)西藥逆轉(zhuǎn)劑進(jìn)行了廣泛探

3、索，但難于克服的正常組織毒性、新藥開(kāi)發(fā)技術(shù)難度及不菲成本等，嚴(yán)重限制了其開(kāi)發(fā)進(jìn)程?；趶V泛抗腫瘤應(yīng)用，以及低毒性、多靶點(diǎn)作用等特點(diǎn)，人們逐漸將研究方向定位于天然中草藥，黃芪即是其中之一。
　　目的：黃芪是臨床常用抗腫瘤中藥之一，具有多種途徑的抗腫瘤機(jī)制，其抗腫瘤藥理研究及逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)備受關(guān)注。本項(xiàng)目采用現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的技術(shù)手段對(duì)Ec9706/cDDP細(xì)胞系進(jìn)行研究并將其具體實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行量化，觀察實(shí)驗(yàn)組中polβ基因表達(dá)水平的變化，探討黃

4、芪提取物(AE)干預(yù)后，食管癌耐藥細(xì)胞化療敏感性有效提升與polβ表達(dá)變化的相關(guān)聯(lián)系，以期拓展中藥逆轉(zhuǎn)耐藥的研究方法，并為中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥提供一定的實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)依據(jù)。
　　方法：①以加入順鉑的RPMI-1640作為 Ec9706/cDDP的培養(yǎng)基；用 MTT法檢測(cè) AE對(duì)參與實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的毒性強(qiáng)度，確定無(wú)細(xì)胞毒性的逆轉(zhuǎn)耐藥實(shí)驗(yàn)所需濃度；用 MTT法分別檢測(cè)加與不加 AE兩組Ec9706/cDDP細(xì)胞培養(yǎng)48h后的細(xì)胞存活率，對(duì)兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)

5、據(jù)行直線回歸統(tǒng)計(jì)，確定每一組別的半數(shù)抑制濃度(IC50)，再進(jìn)一步計(jì)算出對(duì)照組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與實(shí)驗(yàn)組的倍數(shù)關(guān)系即逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。②將細(xì)胞系分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞系給予AE干預(yù)，用RT-PCR法檢測(cè)各組polβ的表達(dá)水平。③所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)一律選擇 SPSS17.0進(jìn)行規(guī)范化處理，數(shù)據(jù)用x±S進(jìn)行標(biāo)注，IC50采用直線回歸法進(jìn)行計(jì)算，采用 t檢驗(yàn)法對(duì)比兩組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)差異。
　　結(jié)果：①黃芪提取物達(dá)一定濃度后對(duì)Ec9706/cDDP表現(xiàn)出一定的

6、細(xì)胞毒性作用，而這種作用的強(qiáng)度與 AE濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。10μg/mL及此濃度以下的低劑量組抑制率與對(duì)照組相比顯示差異不顯著，100μg/mL組及更高濃度組抑制率達(dá)到18.8％和30.9%，與對(duì)照組進(jìn)行 t檢驗(yàn)進(jìn)行比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。是以選擇10μg/mL濃度的無(wú)細(xì)胞毒性AE進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù)。②DDP單獨(dú)應(yīng)用對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度為42.49μg/mL，AE非細(xì)胞毒性劑量10μg/ml與 DDP共同應(yīng)用，半數(shù)抑制濃度降低為25.17μg/

7、mL，二者差異達(dá)1.69倍。③以RT-PCR法檢測(cè)兩組細(xì)胞polβ的表達(dá)水平,對(duì)照組10個(gè)樣本中9個(gè)為高水平表達(dá)，1個(gè)低水平表達(dá)；實(shí)驗(yàn)組10個(gè)樣本中2個(gè)為高水平表達(dá)，余下8個(gè)為低水平表達(dá)。統(tǒng)計(jì)比對(duì)分析兩組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，polβ表達(dá)水平差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：①AE對(duì) Ec9706/cDDP細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用，而其毒性與 AE濃度相關(guān)。②單獨(dú)應(yīng)用 DDP，對(duì)耐藥細(xì)胞系的IC50為42.49μg/mL，10μg/mL非細(xì)胞毒