氯沙坦對殘腎大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞和腎小球內(nèi)皮損傷的影響.pdf

1、【目的】 本課題旨在探討血管緊張素II受體拮抗劑(ARB)對殘腎大鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及對腎小球微脈管系統(tǒng)損傷的逆轉(zhuǎn)作用，為ARB類藥物臨床治療慢性腎臟病提供新的實驗和理論依據(jù)。 【方法】 通過結(jié)扎左腎腎動脈的上支、中支和切除右腎建立殘腎大鼠模型。32只8周齡雄性SD大鼠(體重為200-250g)隨機分成三組： (1)氯沙坦組(n=12)，給予氯沙坦25mg/kg/day灌胃； (2)殘腎模型

2、組(n=12)，給予等量溶媒灌胃； (3)假手術(shù)組(n=8)，給予等量溶媒灌胃。于實驗15周末，收集尿檢測24h尿蛋白，取血檢測白蛋白、尿素氮、肌酐和膽固醇、甘油三酯，分離大鼠外周血單個核細(xì)胞(MNC)，用流式細(xì)胞儀檢測MNU中CD34+細(xì)胞(假定為EPC)百分?jǐn)?shù)，并將MNC接種于培養(yǎng)板，孵育24小時，收集非貼壁細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察EPC集落形成，顯微鏡下計數(shù)EPC集落。EPC集落進(jìn)行免疫熒光檢測，觀察內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31的表

3、達(dá)。取腎組織，用于組織病理(PASM染色)和免疫組化(RECA-1即大鼠內(nèi)皮細(xì)胞抗原-1染色)，比較三組大鼠腎小球纖維化程度和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞密度。 【結(jié)果】 1.與假手術(shù)組比較，殘腎模型組血尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯水平和24小時尿蛋白定量明顯升高(P＜0.05)；與殘腎模型組相比，氯沙坦組血尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯水平和24小時尿蛋白定量明顯下降(P＜0.05)，上述三組血白蛋白無明顯差異(P＞0.05)。

4、 2.從大鼠外周血分離MNC，用流式細(xì)胞儀檢測MNC中CD34+細(xì)胞，殘腎模型組CD34+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(％MNC)顯著低于假手術(shù)組(0.35％±0.08％ vs 1.29％±0.21％)(P＜0.05)，氯沙坦顯著增加了殘腎大鼠CD34+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(1.03％±0.28％ vs0.35％±0.08％)(P＜0.05)。 3.MNC體外培養(yǎng)形成EPC集落，免疫熒光檢測CD31陽性。殘腎模型組EPC集落形成能力顯著低于假手術(shù)組

5、(2.50±0.65 vs 18.60±5.68)(P<0.05)，氯沙坦顯著提高了殘腎大鼠EPC集落形成能力(14.60±3.65 vs 2.50±0.65)(P<0.05)。 4.腎組織病理顯示，殘腎模型組腎小球硬化指數(shù)(GSI)明顯高于假手術(shù)組(0.89±0.12 vs 0.29±0.05)(P<0.05)，氯沙坦顯著降低了殘腎大鼠腎小球硬化指數(shù)(0.34±0.02 vs 0.89±0.12)(P<0.05)。 5

6、.腎組織免疫組化顯示，殘腎模型組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞密度明顯低于假手術(shù)組(1.99±0.31 vs 7.21±0.57)(P<0.05)，氯沙坦顯著增加了殘腎大鼠腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞密度(5.93±0.70 vs 1.99±0.31)(P<0.05)。 【結(jié)論】 1.氯沙坦降低了殘腎大鼠血膽固醇、甘油三酯和24小時尿蛋白水平，改善了腎功能。 2.氯沙坦增加了殘腎大鼠EPC數(shù)目，增強了EPC集落形成能力。 3