FILIP1L重組蛋白及抗體研制.pdf

1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文FILIP1L重組蛋白及抗體研制姓名：馬華娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：盧鋒李淑蓮20100501FILIPlLt組蛋白及抗體研制從食管上皮鱗癌細(xì)胞EC9706中提取mRNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，利用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增含有全長FILIPlL基因(963bp左右)的cDNA，將其定向插入原核表達(dá)載體pET22b，經(jīng)測(cè)序確定載體構(gòu)建成功后，誘導(dǎo)重組質(zhì)粒蛋白表達(dá)；Westernbloming檢測(cè)表達(dá)蛋白成功，并利

2、用親和層析技術(shù)純化得到誘導(dǎo)蛋白；用誘導(dǎo)蛋白免疫動(dòng)物制備多克隆抗體，進(jìn)一步運(yùn)用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)FILIPlL的相互作用蛋白表達(dá)差異。結(jié)果1從食管上皮鱗癌細(xì)胞EC9706中得到了FILIPlL胞外段基因，驗(yàn)證序列準(zhǔn)確無誤；2構(gòu)建了FILIPlL原核表達(dá)載體并誘導(dǎo)誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，純化得到高純度蛋白。3運(yùn)用純化得到的蛋白制備得到效價(jià)為1：1106的高效價(jià)多克隆抗體。4利用免疫共沉淀技術(shù)篩選正常食管上皮細(xì)胞NEC與食管上皮鱗癌細(xì)胞EC9706中的

3、與FILIPlL相關(guān)蛋白的表達(dá)差異情況。結(jié)論本研究從食管上皮鱗癌細(xì)胞9706中得到了FILIPlL胞外段基因，構(gòu)建了FILIPlL原核表達(dá)載體，利用FILIPlL重組質(zhì)粒表達(dá)融合蛋白，并制備多克隆抗體，檢測(cè)正常組織與腫瘤組織中相互作用蛋白的差異表達(dá)，發(fā)現(xiàn)6個(gè)與FILIPlL相關(guān)的蛋白條帶在食管癌細(xì)胞與正常食管上皮細(xì)胞中的表達(dá)有差異，對(duì)這些蛋白條帶的進(jìn)一步鑒定，將為今后進(jìn)一步闡明FILIPlL蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中抑制腫瘤血管生成作用的