癌基因DJ-1在胃癌干細胞中的表達及其作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究癌基因DJ-1在胃癌干細胞(GCSC)中的表達情況及其腫瘤干細胞特性。
  方法:
  懸浮培養(yǎng)法富集胃癌干細胞,利用RT-PCR檢測DJ-1的表達量,從胃正常細胞中克隆出DJ-1基因,通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建并篩選過表達DJ-1的胃癌干細胞(pLV-DJ-1組)及干擾表達的胃癌干細胞(siDJ-1組)。采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染DJ-1胃癌干細胞中DJ-1 mRNA和蛋白

2、質(zhì)表達量,并比較其與空載體組和空白對照組的差異;通過MTS法檢測轉(zhuǎn)染后胃癌干細胞生存及生長情況,并繪制生長曲線比較轉(zhuǎn)染后干細胞增殖變化;運用單因素方差分析比較轉(zhuǎn)染后細胞成瘤能力。
  結(jié)果:
  (1)癌基因DJ-1在胃癌MGC-803細胞中表達量最高。
  (2)DJ-1在胃癌干細胞中高表達。
  (3)過表達DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細胞,實驗組(pLV-DJ-1組)胃癌干細胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達量

3、升高;干擾DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細胞,實驗組(siDJ-1組)胃癌干細胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達量下降。
 ?。?)過表達DJ-1組細胞增殖能力增強;干擾表達DJ-1組細胞增殖能力減弱。
  (5)pLV-DJ-1組細胞自我更新速率加快,成瘤能力增強,pLV-DJ-1組與空載體組成瘤率之比為30.53%±0.82% vs15.8%±0.52%,P<0.001;siDJ-1組細胞增殖速率減慢,成瘤能力降低,siDJ-

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