癌基因DJ-1在胃癌干細胞中的表達及其作用研究.pdf

1、目的：
　　研究癌基因DJ-1在胃癌干細胞(GCSC)中的表達情況及其腫瘤干細胞特性。
　　方法：
　　懸浮培養(yǎng)法富集胃癌干細胞，利用RT-PCR檢測DJ-1的表達量，從胃正常細胞中克隆出DJ-1基因，通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建并篩選過表達DJ-1的胃癌干細胞（pLV-DJ-1組）及干擾表達的胃癌干細胞（siDJ-1組）。采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染DJ-1胃癌干細胞中DJ-1 mRNA和蛋白

2、質(zhì)表達量，并比較其與空載體組和空白對照組的差異；通過MTS法檢測轉(zhuǎn)染后胃癌干細胞生存及生長情況，并繪制生長曲線比較轉(zhuǎn)染后干細胞增殖變化；運用單因素方差分析比較轉(zhuǎn)染后細胞成瘤能力。
　　結(jié)果：
　　(1)癌基因DJ-1在胃癌MGC-803細胞中表達量最高。
　　（2）DJ-1在胃癌干細胞中高表達。
　　（3）過表達DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細胞，實驗組（pLV-DJ-1組）胃癌干細胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達量

3、升高；干擾DJ-1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌干細胞，實驗組（siDJ-1組）胃癌干細胞DJ-1 mRNA和蛋白質(zhì)表達量下降。
　?。?）過表達DJ-1組細胞增殖能力增強；干擾表達DJ-1組細胞增殖能力減弱。
　　(5)pLV-DJ-1組細胞自我更新速率加快，成瘤能力增強，pLV-DJ-1組與空載體組成瘤率之比為30.53％±0.82% vs15.8%±0.52%，P＜0.001；siDJ-1組細胞增殖速率減慢，成瘤能力降低，siDJ-