DJ-1的A39S突變以及DJ-1的SUMO化修飾對DJ-1線粒體定位的影響.pdf

1、分類號U D C 密級——編號中南大學C E N T R A L S O U T H U N l V E R S I T Y七年制碩士學位論文論文題目；學科、專業(yè)：研究生：導師姓名及其專業(yè)技術(shù)職稱 唐北沙教授中南大學二0 0 七年五月七年制學位論文 英文摘要A b s t r a c to b j e c f i v eC o n s t r u c tt h ee u k a r y o t i ce x p r e s s i o

2、np l a s m i d so f t h ew i l d - t y p ea n dA 3 9 S p a t h o g e n i c m u t a n t a s w e l l a s K 1 3 0 R m u t a n t D J - l( p E G F P - N 1 - D J - 1 一彬Z p E G F P - N 1 - D J - 1 - A 3 9 S , p E G F P - N 1 &#

3、183;D J - 1 一K 1 3 0 R ) ,i n v e s t i g a t i n gw h e t h e r D J - 1p a t h o g e n i cm u t a n tA 3 9 S a n d s u m o y l a t i o n o fD J ．1a f f e c t s m i t o c h o n d r i as u b c d l u l a r l o c a l i z a

4、t i o no f D J ．1 ．M e t h o d sA f t e r d o u b l ee l l z y m e d i g e s t i o n o f p a ) N A 3 ．1 小勾c _ H i s ( - ) B - D J 一1 一W T , p C D N A 3 ．1 一M y c —H i s ( - ) B - D J - I - A 3 9 S a n d p G E X 一5 x - l

5、- D J —l —K 1 3 0 R , t h ea i m e ds e g m e n t sw e r el i g a s e da n ds u b c l o n e dt op E G F P - N 1v e c t o r , t h e nt h e t h r e ep l a s m i d sw e r et r a n s f e c t e d i n t o i n v i t r o c u l t

6、 u r e dC O S - 7 c e l l st h r o u g h l i p o s o m e —m e d i a t e d t r a n s f e c t i o n , t h ee x p r e s s i o no f t h er e l e v a n t p r o t e i n s w e r e a s s a y e d b y w e s t e r n b l o t t i n g

7、 a n di m m u n o f l u o r e s c e n c ea n dc o n f o c a l m i c r o s c o p e ．A n dt h e n m i t o c h o n d r i as t a i n i n g a sw e l l a s i m m u n o f l u o r e s c e n c e w e r e u t i l i z e d t o i n v

8、e s t i g a t ew h e t h e rD J - I p a t h o g e n i cm u t a n tA 3 9 Sa n ds u m o y l a t i o no f D J - I p l a yr o l e s i n m i t o c h o n d r i a s u b c e l l u l a r l o c a l i z a t i o n o f D J ．1 ．R e s

9、u l t sT h e c o r r e c t n e s so f t h et h r e ep l a s m i d sw e r ea s c e r m i n e db vd o u b l e ．d i g e s t i o ni d e n t i f y i n ga n dD N A s e q u e n c i n g ．T h ew e s t e r nb l o t t i n g r e s u

10、 l ts h o w e dt h a tt h eC O S - 7c e l l s t r a n s f e c t e dw i t hp E G F P - N 1 ．D J ．1 - Ⅵ億p E G F P - N 1 一D J - l —媽9 S a n d p E G F P - N l —D J 一1 - K 1 3 0 R e x p r e s s e ds u c c e s s f u l l yt h e

11、 t a r g e t E G F P - D J —l f u s i o n p r o t e i n sw i t h t h em o l e c u l a rw e i g h to f5 2 K D ．D J —l —W T a n dD J - 1 - A 3 9 S a s w e l l a s D J ．1 ．K 1 3 0 Rp r o t e i n ss h o w e d ad i f f u s i

12、v eu b i q u i t o u sd i s t r i b u t i o ni nb o t ht h ec y t o p l a s ma n dn u c l e io ft h et r a n s f e c t e dC O S - 7 c e l l s ；w i l d - t y p e ，A 3 9 Sp a t h o g e n i cm u t a n tD J - l a n dD J _ 1

13、．K 1 3 0 Rp r o t e i n s c o - l o c a l i z ew i t hm i t o c h o n d r i a ,B o t h D J 一1 —l 媽9 S a n d D J _ 1 ．K 1 3 0 R d i d n ' t c h a n g e t h e s u b c e l l u l a rl o c a l i z a t i o n i n t h e m i

14、t o c h o n d r i a ．C o n c l u s i o n1 ．S u c e e d l ye o 洳e t t h ee u k a r y o t i ce x p r e s s i o np l a s m i d sp E G F P -N 1 一D J _ 1 一W 工p E G F P - N 1 一D J - 1 一A 3 9 S ，p E G F P - N 1 - D J ．1 ．K 1 3