DADS抑制SRC、ERK通路下調(diào)DJ-1對(duì)淋巴瘤細(xì)胞增殖侵襲的影響.pdf

1、目的:檢測(cè)DJ-1蛋白在惡性淋巴瘤，淋巴結(jié)反應(yīng)性增生及正常淋巴結(jié)組織中的表達(dá)，研究二烯丙基二硫（DADS）對(duì)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系OCI-LY1和Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系Raji生物學(xué)行為，DJ-1表達(dá)及SRC，ERK信號(hào)通路的影響，為淋巴瘤的治療提供新的思路。
　　方法:利用組織芯片結(jié)合免疫組化檢測(cè)不同類型淋巴瘤，淋巴結(jié)反應(yīng)性增生和正常淋巴結(jié)組織中DJ-1蛋白表達(dá)變化；用CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、Giemsa染色法、Tran

2、swell遷移侵襲小室實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)DADS對(duì)OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、分化及遷移侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。Western blot法檢測(cè)DADS處理后淋巴瘤OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞中DJ-1蛋白的表達(dá)，及Src，Erk信號(hào)通路的變化，聯(lián)合Src抑制劑、Erk抑制劑對(duì)淋巴瘤OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞中DJ-1蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:組織芯片結(jié)合免疫組化結(jié)果顯示：霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤(

3、包括彌漫性大B)細(xì)胞核DJ-1高表達(dá)率分別為42.9％、72.1%，高于非腫瘤組織（淋巴結(jié)反應(yīng)性增生和正常淋巴結(jié)）14.3%（P<0.05），細(xì)胞漿高表達(dá)率分別為100%、93.4%，高于非腫瘤組織（淋巴結(jié)反應(yīng)性增生和正常淋巴結(jié)）28.6%（P<0.05）。CCK-8法結(jié)果顯示：OCI-LY1細(xì)胞經(jīng)不同濃度（5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L）DADS作用24h、48h、72h后，增殖抑制作用呈時(shí)間-濃度

4、依賴性增長(zhǎng)。在Raji細(xì)胞中，經(jīng)不同濃度（2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L）DADS作用24h、48h、72h后，同樣呈時(shí)間-濃度依賴性抑制細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示：OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞經(jīng)DADS作用后，G1期百分率分別由47.72%、30.90%上升至54.43%、51.89%（P<0.05），出現(xiàn)G1期阻滯。吉姆薩染色顯示，DADS能誘導(dǎo)Raji細(xì)胞和OCI-LY1細(xì)胞向正常淋巴細(xì)

5、胞方向分化。Western blot結(jié)果顯示：DADS處理OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞12h、24h、48h后，DJ-1蛋白表達(dá)水平表現(xiàn)為時(shí)間依賴性的下降（P<0.05）。經(jīng)DADS處理OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞5min、15min、30min、60min后，p-Src、p-Erk的蛋白表達(dá)水平較未處理的各組均下降（P<0.05），且呈時(shí)間依賴性，Src、Erk總蛋白表達(dá)水平?jīng)]有顯著變化。Src抑制劑、Erk抑制劑以及二者分別

6、聯(lián)合DADS處理OCI-LY1細(xì)胞和Raji細(xì)胞12h、24h、48h后，DJ-1蛋白水平同樣表現(xiàn)為時(shí)間依賴性的下降（P<0.05），且聯(lián)合處理組與Src抑制劑、Erk抑制劑單獨(dú)處理組相比DJ-1蛋白水平下調(diào)更加明顯。遷移侵襲實(shí)驗(yàn)顯示：Src抑制劑、Erk抑制劑作能協(xié)同DADS抑制Raji細(xì)胞和OCI-LY1細(xì)胞的遷移和侵襲。
　　結(jié)論:
　　1.DJ-1在多種類型淋巴瘤細(xì)胞核與細(xì)胞漿中均高表達(dá)。
　　2.DADS可抑