原癌基因c-src在精原干細(xì)胞中表達(dá)及作用的研究.pdf

1、目的：探索及完善精原干細(xì)胞的分離、鑒定和體外培養(yǎng)技術(shù)；研究原癌基因c-src對(duì)體外培養(yǎng)的精原干細(xì)胞存活及與凋亡密切相關(guān)的csspase-3表達(dá)的影響。方法：非連續(xù)密度梯度離心及差速貼壁法分離精原干細(xì)胞；c-Kit和TERT細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定精原干細(xì)胞；用MTT比色法檢測(cè)精原干細(xì)胞的存活及增殖情況，觀察AS-src對(duì)精原干細(xì)胞存活的劑量性影響及AS-src對(duì)精原干細(xì)胞存活的時(shí)間性影響；用RT-PCR檢測(cè)c-src mRNA和caspas

2、e-3 mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：非連續(xù)密度梯度及差速貼壁法分離精原干細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞存活率分別為92.5％和92.1％；分離后所獲取的細(xì)胞c-Kit和TERT免疫組織化學(xué)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均值分別為90.8±1.O％和91.7±1.2％；精原干細(xì)胞在含10％NBS的DMEM中培養(yǎng)96h時(shí)增殖達(dá)高峰；10μmol/lAS-src作用12h后精原干細(xì)胞存活率下降(P＜O.05)，于24h，48h，72h持續(xù)下降(P＜0.01)；與

3、S-src和空白對(duì)照組相比，AS-src組c-srcmRNA水平明顯下調(diào)，而caspase-3 mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)。結(jié)論：非連續(xù)密度梯度結(jié)合差速貼壁法是分離精原干細(xì)胞的有效方法；以c-Kit及TERT作為marker分子通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)為精原干細(xì)胞的鑒定提供較為充分的依據(jù)；精原干細(xì)胞可以在含10％NBS的DMEM培養(yǎng)基中短期增殖；c-Src可以促進(jìn)精原干細(xì)胞的存活；c-Src可能通過PI-3K/PKB途徑，導(dǎo)致Caspase-