血液和尿液中Ets的高效液相串聯(lián)質譜檢測及其在法醫(yī)學中的應用.pdf

1、目的:
　　酒精成為“馬路殺手”是全球共同面對的一個社會難題，大約50％至60％的交通事故與酒后駕車有關，灑后駕駛已成為車禍致死的首要原因。目前主要采用檢測血液中乙醇予以認定酒后駕車，但由于乙醇在體內代謝較快.一般飲酒后6～8 h體內已檢測不到乙醇，特別是在酒后駕車肇事逃逸案件中，抽血與事故發(fā)生時間間隔過長，血液中往往測不出乙醇成分?？梢姮F(xiàn)行方法，根據(jù)血液中乙醇含量來判斷事發(fā)時間及當事人飲用酒精量時存在諸多不足。Ets是乙醇非氧化

2、代謝途徑的直接代謝產物，是乙醇在磺基轉移酶的作用下由硫酸鹽活化而來。飲酒后8小時Ets仍可以在血液中檢測到，3-5天仍然可以在尿液中檢測到，因此Ets可以作為乙醇代謝的標志物用于法醫(yī)學鑒定中判定酒駕。本實驗建立高效液相串聯(lián)質譜法檢測血液和尿液中硫酸乙酯的方法，運用該方法測定受試者血液和尿液中的硫酸乙酯，從而了解硫酸乙酯的代謝動力學，并將其運用于法醫(yī)學中判定酒后駕駛。
　　方法:
　　1、將D5-EtS內標工作液和乙腈（甲醇）

3、加入空白人血液（尿液），經(jīng)渦旋、離心，取上清液后用40℃水浴氮氣吹干，以甲醇（含0.1％甲酸）復溶后離心，取上清液進樣分析。
　　2、用高效液相色譜質譜測定血液和尿液中EtS。色譜條件:色譜柱:BOSTON-C18柱(100 mm×2.1 mmID，dp3μm);流動相:乙腈(A)-水(B)（含0.1％甲酸），梯度洗脫;流速:0.2 mL·min-1;柱溫:40℃;進樣體積:5μL。質譜條件:離子源為ESI源;采用負離子模式質譜檢

4、測，在選擇離子監(jiān)測模式下進行定性，并采用內標法進行定量。
　　3、7名志愿者禁酒一周后，按照0.60±0.07g/kg飲用酒精，在一定的時間間隔內每位志愿者收集12份血液標本、10份尿液標本，用液相色譜串聯(lián)質譜測定血液和尿液中的Ets濃度;用氣相色譜-火焰離子化檢測器檢測相應血液和尿液中的乙醇濃度;用Modular DDPP全自動生化分析儀測定尿中的肌酐濃度。
　　結果:
　　1、尿液中EtS在10.96～10960n

5、g/mL范圍內線性關系良好，線性回歸方程:Y=0.0008X+0.3329(r=0.989)，最低檢出限為0.1 ng/mL，平均回收率為89.6％～117.4％，相對標準偏差為2.8％～10.2％;血液中EtS在5.48～10960ng/mL范圍內線性關系良好;線性回歸方程Y=0.001X+0.251(r=0.993)，最低檢出限(LOD)為0.1ng/mL，平均回收率為80.4％～114.0％之間，相對標準偏差為1.4％～8.72％

6、。
　　2、在消耗0.60±0.07g/kg酒精后，血液中乙醇的最高濃度為66.5±12.8 mg/100ml，血液中EtS的最高濃度為79.9±12.3ng/ml;血液中乙醇達到最高濃度的時間為0.86±0.24h，血液中EtS達到最高濃度的時間為3.36h±0.56h;血液中乙醇的最長檢測時間為5.71±0.95h;最后一次采血(8h)均可在血液中檢測到EtS;在血液中乙醇濃度(mg/100ml)與EtS濃度(ng/ml)之比

7、大于1的時間在開始喝酒的3h內(范圍在2-3.5h)，隨后乙醇濃度與EtS濃度之比小于1。在尿液中，乙醇的最高濃度為193.1±26.2mg/100ml，EtS的最高濃度為6882.8±1095.0ng/ml;乙醇達到最高濃度的時間均為4h，EtS達到最高濃度的時間為4.57±0.98h;尿液中乙醇的最長檢測時間為13.9±0.6h，尿液中EtS的最長檢測時間為37.7±5.5h。在血液中，乙醇的最高濃度與乙醇的曲線下面積之間存在相關性

8、（相關系數(shù)為0.723，P＜0.05），乙醇的最高濃度與EtS的曲線下面積之間存在相關性(相關系數(shù)為0.714，P＜0.05);EtS的最高濃度與乙醇的曲線下面積之間存在相關性(相關系數(shù)為0.79，P＜0.05);EtS的最高濃度與EtS的曲線下面積之間存在相關性(相關系數(shù)為0.756，P＜0.05)，在血液中，乙醇的最高濃度與EtS的最高濃度之間存在相關性(相關系數(shù)為0.684，P＜0.05)。
　　結論:
　　1、建立了

9、測定血液和尿液中Ets的高效液相串聯(lián)質譜方法，樣本前處理簡單方便、穩(wěn)定性好、靈敏度高、具有較高的回收率和精密度，可應用于法醫(yī)學中血液和尿液標本中Ets的檢測。
　　2、通過對血液和尿液中酒精和EtS的吸收、分布、清除的代謝動力學的研究，表明血液中的EtS的含量可以用來作為飲酒時間的估計，在連續(xù)的血液樣本中檢測到EtS升高以及血液中乙醇和EtS濃度比大于1，均預示近期的飲酒（3.5h內），這是對用血液中乙醇濃度估計飲酒時間的傳統(tǒng)方法